| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言 | 第16-30页 |
| 1.1 猪伪狂犬病的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 伪狂犬病毒病原学 | 第16-20页 |
| 1.1.1.1 伪狂犬病毒的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.1.2 伪狂犬病毒的形态学特征 | 第17页 |
| 1.1.1.3 伪狂犬病毒的理化性质 | 第17-18页 |
| 1.1.1.4 伪狂犬病毒的基因组结构及其编码的蛋白 | 第18-20页 |
| 1.2 猪伪狂犬病流行病学 | 第20-23页 |
| 1.2.1 易感动物 | 第20-21页 |
| 1.2.2 传播途径 | 第21页 |
| 1.2.3 发病机理 | 第21页 |
| 1.2.4 临床症状 | 第21-23页 |
| 1.2.5 病理变化 | 第23页 |
| 1.3 猪伪狂犬病的诊断 | 第23-26页 |
| 1.3.1 病毒分离鉴定 | 第23页 |
| 1.3.2 动物接种试验 | 第23-24页 |
| 1.3.3 血清学检测方法 | 第24页 |
| 1.3.3.1 中和试验 | 第24页 |
| 1.3.3.2 乳胶凝集试验 | 第24页 |
| 1.3.3.3 酶联免疫吸附试验 | 第24页 |
| 1.3.4 分子生物学检测 | 第24-25页 |
| 1.3.4.1 PCR检测 | 第24-25页 |
| 1.3.4.2 核酸探针检测 | 第25页 |
| 1.3.4.3 LAMP诊断 | 第25页 |
| 1.3.5 鉴别诊断 | 第25-26页 |
| 1.4 猪伪狂犬疫苗研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4.1 传统疫苗 | 第26页 |
| 1.4.2 基因缺失疫苗 | 第26-27页 |
| 1.4.3 重组疫苗 | 第27页 |
| 1.4.4 亚单位疫苗 | 第27页 |
| 1.5 猪伪狂犬病的防制 | 第27-28页 |
| 1.5.1 引种和饲养管理 | 第27页 |
| 1.5.2 免疫接种 | 第27-28页 |
| 1.5.3 发病后的控制措施 | 第28页 |
| 1.6 斑点杂交检测方法的原理和应用 | 第28页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 材料与方法 | 第30-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 毒株和病料 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第30页 |
| 2.1.3 其他试剂及其配制 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 PCR检测方法的建立 | 第31-33页 |
| 2.2.1.1 引物的设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.1.3 PCR反应体系的建立 | 第32-33页 |
| 2.2.1.4 PCR反应引物浓度的优化 | 第33页 |
| 2.2.1.5 PCR反应退火温度的优化 | 第33页 |
| 2.2.2 核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第33-37页 |
| 2.2.2.1 质粒标准品的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2.3 连接产物的转化 | 第35页 |
| 2.2.2.4 质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2.5 探针的制备 | 第36页 |
| 2.2.2.6 PCR结合核酸斑点杂交步骤 | 第36-37页 |
| 2.2.3 PCR和PCR结合核酸斑点杂交的特异性试验 | 第37-39页 |
| 2.2.4 PCR和PCR结合核酸斑点杂交的灵敏性试验 | 第39页 |
| 2.2.5 PCR和PCR结合核酸斑点杂交检测方法的应用 | 第39页 |
| 2.2.5.1 病料核酸的提取 | 第39页 |
| 2.2.5.2 PCR和PCR结合核酸斑点杂交方法的检测 | 第39页 |
| 2.2.6 PRV阳性样品gE基因和TK基因序列分析 | 第39-41页 |
| 2.2.6.1 引物的设计 | 第39页 |
| 2.2.6.2 PCR扩增及测序 | 第39-41页 |
| 2.2.7 山东地区猪场样品抗体检测 | 第41-42页 |
| 2.2.7.1 血清样品的处理 | 第41页 |
| 2.2.7.2 PRV-gE抗体ELISA检测方法 | 第41-42页 |
| 结果与分析 | 第42-50页 |
| 3.1 PCR检测方法的建立 | 第42-43页 |
| 3.1.1 PCR反应引物浓度的优化结果 | 第42页 |
| 3.1.2 PCR反应退火温度的优化结果 | 第42-43页 |
| 3.2 PCR结合核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第43-45页 |
| 3.2.1 PCR和PCR结合核酸斑点杂交检测方法的特异性试验结果 | 第43-44页 |
| 3.2.2 PCR和PCR结合核酸斑点杂交检测方法的灵敏性试验结果 | 第44页 |
| 3.2.3 PCR结合核酸斑点杂交检测方法在临床样品检测中的应用 | 第44-45页 |
| 3.3 gE和TK基因序列分析 | 第45-48页 |
| 3.3.1 gE基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3.2 TK基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第47-48页 |
| 3.4 山东地区猪场样品抗体检测结果 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 猪伪狂犬病毒PCR结合核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第50-51页 |
| 4.2 PCR结合核酸斑点杂交检测在临床样品检测中的应用与流行毒株序列分析 | 第51-53页 |
| 4.3 山东地区猪场样品gE抗体检测 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第65页 |
