| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 七鳃鳗研究进展及其特殊地位 | 第9-10页 |
| 1.1.1 东北七鳃鳗概况 | 第9页 |
| 1.1.2 七鳃鳗研究进展 | 第9-10页 |
| 1.1.3 七鳃鳗的研究价值 | 第10页 |
| 1.2 PHB研究进展 | 第10-15页 |
| 1.2.1 PHB的结构 | 第10页 |
| 1.2.2 PHB的定位 | 第10-11页 |
| 1.2.3 PHB的功能 | 第11-15页 |
| 1.2.3.1 PHB在细胞核中的功能 | 第11-13页 |
| 1.2.3.2 PHB在线粒体中的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3.3 PHB在氧化应激中的作用 | 第14-15页 |
| 1.3 氧化应激 | 第15-17页 |
| 1.3.1 活性氧及氧化应激 | 第15页 |
| 1.3.2 活性氧的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.3.3 活性氧对机体的损伤 | 第16页 |
| 1.3.4 氧化应激的研究意义 | 第16-17页 |
| 1.4 本论文的研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第2章 phb2在七鳃鳗各组织中的表达 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第18-23页 |
| 2.1.1 实验材料、试剂与设备 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.1.2.1 免疫荧光检测Lm-PHB2蛋白的亚细胞定位 | 第19页 |
| 2.1.2.2 阿霉素免疫东北七鳃鳗及组织分离 | 第19页 |
| 2.1.2.3 Total RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.1.2.4 RNA反转录 | 第20-21页 |
| 2.1.2.5 RT-PCR及QPCR检测phb2在各组织中的表达 | 第21-22页 |
| 2.1.2.6 Western Blot检测PHB2在各组织中的表达 | 第22-23页 |
| 2.2 结果 | 第23-29页 |
| 2.2.1 七鳃鳗Lm-PHB2蛋白的亚细胞定位 | 第23-25页 |
| 2.2.2 RNA提取结果 | 第25页 |
| 2.2.3 氧化应激模型构建 | 第25-26页 |
| 2.2.4 phb2在七鳃鳗各组织中mRNA的相对表达量 | 第26-28页 |
| 2.2.5 PHB2在七鳃鳗各组织中的蛋白表达量 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-30页 |
| 2.4 小结 | 第30-31页 |
| 第3章 rpEGFP-N1-Lm-phb2真核表达载体的构建 | 第31-42页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第31-37页 |
| 3.1.1 实验材料、试剂与设备 | 第31-32页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.1.2.1 七鳃鳗phb2基因引物设计 | 第32页 |
| 3.1.2.2 七鳃鳗phb2基因扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.2.3 目的片段phb2的回收 | 第33-34页 |
| 3.1.2.4 七鳃鳗phb2基因真核表达重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.2.5 质粒提取、鉴定及去内毒素 | 第35-36页 |
| 3.1.2.6 张氏肝细胞(Chang liver cell,CHL)的培养 | 第36页 |
| 3.1.2.7 瞬时转染 | 第36-37页 |
| 3.2 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.2.1 七鳃鳗phb2基因扩增 | 第37页 |
| 3.2.2 七鳃鳗phb2真核表达重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.3 重组质粒rpEGFP-N1-Lm-phb2的真核转染验证 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-41页 |
| 3.4 小结 | 第41-42页 |
| 第4章 Lm-PHB2增强CHL和L132细胞的氧化应激耐受性 | 第42-51页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第42-44页 |
| 4.1.1 实验材料、试剂与设备 | 第42页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.1.2.1 rLm-PHB2的诱导表达 | 第42-43页 |
| 4.1.2.2 rLm-PHB2的纯化与定量 | 第43页 |
| 4.1.2.3 细胞培养 | 第43-44页 |
| 4.1.2.4 MTT细胞增殖实验 | 第44页 |
| 4.1.2.5 细胞转染 | 第44页 |
| 4.1.2.6 Western blot实验 | 第44页 |
| 4.2 实验结果 | 第44-49页 |
| 4.2.1 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第44-45页 |
| 4.2.2 重组蛋白rLm-PHB2增强CHL和L132细胞氧化应激耐受性 | 第45-48页 |
| 4.2.3 真核表达Lm-PHB2增强CHL细胞氧化应激耐受性 | 第48-49页 |
| 4.3 讨论 | 第49-50页 |
| 4.4 小结 | 第50-51页 |
| 第5章 七鳃鳗PHB2增强细胞氧化应激耐受作用的机制初探 | 第51-59页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第51-53页 |
| 5.1.1 实验材料、试剂与设备 | 第51页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 5.1.2.1 真核表达载体的瞬时转染 | 第51页 |
| 5.1.2.2 激光共聚焦显微镜荧光检测 | 第51-52页 |
| 5.1.2.3 QPCR检测phb2、tp53、vdac3在七鳃鳗各组织中的表达 | 第52-53页 |
| 5.2 实验结果 | 第53-57页 |
| 5.2.1 RNA提取结果 | 第53页 |
| 5.2.2 氧化应激状态下Lm-PHB2蛋白的定位及迁移 | 第53-54页 |
| 5.2.3 phb2、tp53、vdac3在免疫后七鳃鳗各组织的分布变化 | 第54-57页 |
| 5.3 讨论 | 第57-58页 |
| 5.4 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 本文创新点 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 附录1 pEGFP-N1质粒图谱 | 第65页 |
| 附录2 阿霉素诱导七鳃鳗氧化应激后提取心脏、肝脏、肾脏、肠、肌肉共计30个组织样品反转得到的cDNA浓度 | 第65-66页 |
| 附录3 大肠杆菌免疫七鳃鳗后提取心脏、肝脏、肾脏共计18个组织样品反转得到的cDNA浓度 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
