首页--医药、卫生论文--神经病学与精神病学论文--脊髓疾病论文--运动神经元疾病论文

ALS相关SOD1突变体的自噬性降解及Gemin3作为ALS相关FUS蛋白的结合蛋白的鉴定

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第一章 综述第13-49页
    1.1 ALS概述第13页
    1.2 SOD1突变体引起运动神经元毒性机制的研究进展第13-15页
        1.2.1 SOD1突变体的毒性:获得性毒性而不是丧失了SOD1功能第13-14页
        1.2.2 SOD1突变体的毒性机制第14-15页
        1.2.3 小结第15页
    1.3 自噬的过程、功能及与人类疾病的关系第15-31页
        1.3.1 自噬-溶酶体降解与泛素-蛋白酶体降解的比较第16-18页
        1.3.2 自噬过程第18-25页
        1.3.3 自噬功能的研究进展第25-27页
        1.3.4 自噬与人类疾病第27-31页
        1.3.5 展望第31页
    1.4 FUS作为ALS致病蛋白的发现及功能研究进展第31-37页
        1.4.1 FUS的结构和核酸特性第32-33页
        1.4.2 FUS蛋白的修饰调控第33-34页
        1.4.3 FUS蛋白的功能第34-36页
        1.4.4 ALS相关FUS:失去功能或获得性毒性第36-37页
        1.4.5 展望第37页
    1.5 SMN复合体及Gemin3功能研究进展第37-48页
        1.5.1 SMN复合体组成第37-39页
        1.5.2 U snRNP 的组装第39-42页
        1.5.3 SMN复合体决定U snRNP组装的特异性第42-43页
        1.5.4 SMN复合体的其它功能第43-45页
        1.5.5 Gemin3及其结合蛋白第45-48页
    1.6 研究目的与意义第48-49页
第二章 SOD1野生型及ALS相关突变体在细胞内表达的比较第49-56页
    2.1 前言第49页
    2.2 实验仪器第49-50页
    2.3 实验材料与方法第50-51页
        2.3.1 质粒构建第50页
        2.3.2 细胞培养及转染第50页
        2.3.3 荧光显微镜观察第50页
        2.3.4 细胞裂解及差速离心分离细胞的不同组分第50-51页
        2.3.5 SDS-PAGE及Western杂交第51页
        2.3.6 图像分析及数据处理第51页
    2.4 实验结果第51-54页
        2.4.1 野生型与突变体SOD1在细胞内表达的比较第51-52页
        2.4.2 EGFP标签的野生型和突变体SOD1荧光强度的比较第52-53页
        2.4.3 EGFP-SOD1突变体在胞质中形成大的聚集体第53页
        2.4.4 EGFP-SOD1突变体形成去垢剂不溶性部分第53-54页
    2.5 讨论第54-56页
第三章 ALS相关SOD1突变体的自噬性降解第56-71页
    3.1 前言第56-57页
    3.2 实验仪器第57-58页
    3.3 实验材料与方法第58-60页
        3.3.1 质粒构建第58页
        3.3.2 细胞培养第58-59页
        3.3.3 细胞转染及药物处理第59页
        3.3.4 细胞裂解及差速离心分离细胞的去垢剂不溶部分第59页
        3.3.5 Western杂交分析第59页
        3.3.6 荧光显微镜观察第59-60页
        3.3.7 统计分析第60页
    3.4 实验结果第60-69页
        3.4.1 诱导自噬促进SOD1降解第60-63页
        3.4.2 抑制自噬小体的形成导致SOD1的降解受阻第63-64页
        3.4.3 抑制自噬小体-溶酶体的融合阻碍SOD1的降解第64-66页
        3.4.4 抑制溶酶体中的组织蛋白酶活性导致SOD1发生堆积第66-67页
        3.4.5 利用双荧光标签观察活细胞中SOD1的自噬性降解第67-69页
    3.5 讨论第69-71页
第四章 SOD1 突变体对自噬活性的影响第71-79页
    4.1 前言第71页
    4.2 实验动物第71页
    4.3 实验仪器第71-72页
    4.4 实验材料与方法第72-73页
        4.4.1 质粒构建第72页
        4.4.2 细胞培养与转染第72页
        4.4.3 细胞裂解与组织匀浆第72-73页
        4.4.4 免疫共沉淀(Co-IP)第73页
        4.4.5 Western杂交分析第73页
        4.4.6 图像分析及数据处理第73页
    4.5 实验结果第73-77页
        4.5.1 Western杂交分析转基因小鼠脊髓中LC3Ⅱ的表达水平第73-74页
        4.5.2 细胞内过表达SOD1 G93A活化自噬第74-76页
        4.5.3 SOD1 G93A活化自噬可能机制的研究第76-77页
    4.6 讨论第77-79页
第五章 Gemin3作为ALS相关FUS蛋白的结合蛋白的鉴定第79-99页
    5.1 前言第79-80页
    5.2 实验仪器第80-81页
    5.3 实验材料与方法第81-85页
        5.3.1 质粒构建第81页
        5.3.2 细胞培养与转染第81-82页
        5.3.3 液相色谱-质谱联用鉴定Gemin3是FUS的结合蛋白第82页
        5.3.4 蛋白质聚集化分析第82页
        5.3.5 免疫共沉淀(Co-IP),RNA免疫沉淀(RIP),GST pulldown及Western杂交分析第82-83页
        5.3.6 Northern 杂交第83-84页
        5.3.7 激光共聚焦显微镜观察第84页
        5.3.8 体内剪接实验第84页
        5.3.9 反转录PCR第84-85页
        5.3.10 图像分析及数据处理第85页
    5.4 实验结果第85-96页
        5.4.1 FUS与Gemin3相互作用第85-87页
        5.4.2 FUS与Gemin3结合区段的确定第87-89页
        5.4.3 Gemin3被包裹进FUS突变体形成的胞质聚集体第89-92页
        5.4.4 ALS相关FUS突变体使更多的Gemin3在去垢剂不溶性部分发生堆积第92-93页
        5.4.5 过表达FUS△32导致细胞内U snRNP水平下调第93-94页
        5.4.6 FUS突变体改变E1A基因的5’剪接位点的选择第94-96页
    5.5 讨论第96-99页
第六章 结论第99-100页
参考文献第100-119页
缩略词第119-120页
致谢第120-121页
作者简介第121页

论文共121页,点击 下载论文
上一篇:肿瘤相关基因启动子甲基化和人脑胶质瘤临床预后相关性研究
下一篇:亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制研究