| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 摘要 | 第11-14页 |
| 1. Review of Literature | 第14-26页 |
| 1.1 Preamble | 第14页 |
| 1.2 Testis | 第14-15页 |
| 1.3 Spermatogenesis | 第15-16页 |
| 1.4 Stages of Spermatogenesis | 第16-18页 |
| 1.4.1 Mitosis | 第16页 |
| 1.4.2 Meiosis | 第16页 |
| 1.4.3 Spermiogenesis | 第16-18页 |
| 1.5 In vivo spermatogenesis | 第18页 |
| 1.6 In vitro spermatogenesis | 第18-19页 |
| 1.7 Comparison of spermatogenesis in rodents and bovine | 第19-20页 |
| 1.8 Strategies for isolation of spermatogonial stem cells | 第20-21页 |
| 1.8.1 Mechanical Isolation | 第20-21页 |
| 1.8.2 Enzymatic Isolation | 第21页 |
| 1.9 Purification/Enrichment of spermatogonial stem cells | 第21-23页 |
| 1.9.1 Laminin Selection | 第21页 |
| 1.9.2 Flow Cytometry | 第21-22页 |
| 1.9.3 Percoll density gradient separation | 第22-23页 |
| 1.9.4 Morphology based enrichment | 第23页 |
| 1.10 Identification of Spermatogonia | 第23-26页 |
| 1.10.1 Cluster Designation 34 | 第24页 |
| 1.10.2 Podocalyxin | 第24页 |
| 1.10.3 Caudal type homebox 2 | 第24-25页 |
| 1.10.4 Zinc finger protein 42 | 第25-26页 |
| 2. Isolation,identification and enrichment of type A spermatogonia from the testis of Chinese crossbred buffaloes(Swamp×River) | 第26-42页 |
| 2.1 Introduction | 第26-27页 |
| 2.2 Materials and Methods | 第27-32页 |
| 2.2.1 Testes collection and tissue preparation | 第27-28页 |
| 2.2.2 Testicular Histology | 第28页 |
| 2.2.3 Cell viability and yield | 第28页 |
| 2.2.4 Immunohistochemistry and Immunocytochemistry | 第28-29页 |
| 2.2.5 Experimental Design | 第29-32页 |
| 2.2.6 Statistical Analysis | 第32页 |
| 2.3 Results | 第32-39页 |
| 2.3.1 Testicular histology | 第32-36页 |
| 2.3.2 Identification of spermatogonia in the testis and after isolation | 第36页 |
| 2.3.3 Application of erythrocyte lysis buffer solution | 第36-37页 |
| 2.3.4 Selection of isolation strategy | 第37-38页 |
| 2.3.5 Application of ECM molecules for the enrichment of type A spermatogonia | 第38-39页 |
| 2.4 Discussion | 第39-42页 |
| 3. Cryopreservation of Type A spermatogonia in Chinese crossbred buffaloes (Swamp ×River) | 第42-50页 |
| 3.1 Introduction | 第42-43页 |
| 3.2 Material and methods | 第43-45页 |
| 3.2.1 Testes collection and tissue preparation | 第43页 |
| 3.2.2 Histology and immunohistochemistry | 第43-44页 |
| 3.2.3 Isolation of Type A spermatogonia | 第44页 |
| 3.2.4 Cell viability | 第44页 |
| 3.2.5 Cryopreservation and thawing | 第44-45页 |
| 3.2.6 Analysis of oxidative stress parameters | 第45页 |
| 3.2.7 Statistical Analysis | 第45页 |
| 3.3 Results | 第45-47页 |
| 3.3.1 Testicular histology and immunohistochemistry | 第45-46页 |
| 3.3.2 Effect of taurine on viability after thawing | 第46-47页 |
| 3.3.3 Analysis of oxidative stress parameters | 第47页 |
| 3.4 Discussion | 第47-50页 |
| 4. Expression analysis of spermatogonia specific markers in Chinese crossbred buffalo(Swamp x River) | 第50-63页 |
| 4.1 Introduction | 第50-51页 |
| 4.2 Materials and methods | 第51-54页 |
| 4.2.1 Testes collection and tissue preparation | 第51页 |
| 4.2.2 Isolation of spermatogonial stem cells(SSCs) | 第51-52页 |
| 4.2.3 Immunohistochemistry of testis tissues | 第52页 |
| 4.2.4 RNA extraction and cDNA synthesis | 第52页 |
| 4.2.5 Polymerase Chain Reaction,cloning and sequencing of CD34,PODXL,CDX2 and REX1 | 第52-53页 |
| 4.2.6 Bioinformatic Analyses | 第53页 |
| 4.2.7 Quantitative real-time PCR | 第53-54页 |
| 4.2.8 Western-Blot Analysis | 第54页 |
| 4.2.9 Statistical analysis | 第54页 |
| 4.3 Results | 第54-61页 |
| 4.3.1 CD34,PODXL,REX1 and CDX2 mRNA is expressed in testis of prepubertal and adult buffalo bulls | 第54-55页 |
| 4.3.2 Spermatogonia express CD34,PODXL,REX1 and CDX2 | 第55-60页 |
| 4.3.3 Quantitative real-time PCR | 第60页 |
| 4.3.4 Western blotting | 第60-61页 |
| 4.4 Discussion | 第61-63页 |
| 5. Conclusions and Future Directions | 第63-64页 |
| References | 第64-73页 |
| Curriculum Vitea | 第73-75页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第75页 |
