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利用油菜油体系统表达重组人胰岛素原的研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 绪论第13-29页
   ·糖尿病的研究进展第13-17页
     ·糖尿病的概念和发病趋势第13-14页
     ·糖尿病种类和发病机制第14-17页
     ·糖尿病并发症第17页
   ·胰岛素与糖尿病第17-21页
     ·胰岛素与糖尿病的密切联系第17-19页
     ·胰岛素发现与结构第19-21页
     ·胰岛素功能与种类第21页
   ·基因工程技术表达重组胰岛素的研究第21-23页
   ·利用转基因植物生产药用蛋白的研究进展第23-24页
   ·新型植物生物反应器——植物油体表达系统第24-28页
   ·本研究的目的及意义第28-29页
第二章 材料与方法第29-52页
   ·材料与试剂第29-30页
     ·植物材料第29页
     ·菌株与载体第29页
     ·主要生物试剂第29页
     ·溶液与培养基配方第29页
     ·主要仪器设备第29-30页
   ·实验方法第30-52页
     ·人胰岛素原融合基因植物双元表达载体构建第30-34页
     ·op::thom转化根癌农杆菌EHA105第34-35页
     ·油菜遗传转化第35-36页
     ·转基因油菜DNA提取及PCR鉴定第36-38页
     ·转基因油菜Southern blot分析第38-44页
     ·转基因油菜RT-PCR分析第44-46页
     ·蛋白表达水平检测第46-52页
第三章 结果与分析第52-71页
   ·油体- 人胰岛素原融合基因(oleosin-mins )植物表达载体op::his-og-mins-2300-twin(op::thom)构建第52-58页
     ·人胰岛素原基因mins设计合成第52-53页
     ·载体构建思路第53-55页
     ·目的片段获得与连接第55-56页
     ·双元双边界表达载体op::thom鉴定第56-57页
     ·工程菌EHA105 制备第57-58页
   ·油菜的遗传转化第58-60页
     ·Kan筛选压确定第58-59页
     ·油菜遗传转化第59-60页
   ·转基因油菜PCR检测第60-61页
   ·转基因油菜Southern blot分析第61-62页
   ·转基因油菜RT-PCR分析第62-65页
   ·转基因油菜外源蛋白翻译水平检测第65-71页
     ·转基因油菜种子总蛋白及油体蛋白测定第65-67页
     ·转基因油菜种子靶蛋白表达Western blot分析第67-69页
     ·转基因油菜种子靶蛋白ELISA检测第69-71页
第四章 小结和讨论第71-75页
   ·小结第71页
   ·讨论第71-75页
     ·载体与基因设计第71-72页
     ·选择油菜作为表达系统的意义第72-73页
     ·油菜油体系统表达胰岛素原利弊第73-74页
     ·后续研究工作第74-75页
参考文献第75-79页
附录一 溶液的配制第79-81页
附录二 英文缩略词表第81-83页
附录三 主要生物试剂第83-85页
附录四 溶液与培养基配方第85-87页
附录五 主要仪器设备第87-88页
附录六 攻读硕士期间发表论文与参与课题第88-89页
致谢第89-90页

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