摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-13页 |
第一章 绪论 | 第13-29页 |
·糖尿病的研究进展 | 第13-17页 |
·糖尿病的概念和发病趋势 | 第13-14页 |
·糖尿病种类和发病机制 | 第14-17页 |
·糖尿病并发症 | 第17页 |
·胰岛素与糖尿病 | 第17-21页 |
·胰岛素与糖尿病的密切联系 | 第17-19页 |
·胰岛素发现与结构 | 第19-21页 |
·胰岛素功能与种类 | 第21页 |
·基因工程技术表达重组胰岛素的研究 | 第21-23页 |
·利用转基因植物生产药用蛋白的研究进展 | 第23-24页 |
·新型植物生物反应器——植物油体表达系统 | 第24-28页 |
·本研究的目的及意义 | 第28-29页 |
第二章 材料与方法 | 第29-52页 |
·材料与试剂 | 第29-30页 |
·植物材料 | 第29页 |
·菌株与载体 | 第29页 |
·主要生物试剂 | 第29页 |
·溶液与培养基配方 | 第29页 |
·主要仪器设备 | 第29-30页 |
·实验方法 | 第30-52页 |
·人胰岛素原融合基因植物双元表达载体构建 | 第30-34页 |
·op::thom转化根癌农杆菌EHA105 | 第34-35页 |
·油菜遗传转化 | 第35-36页 |
·转基因油菜DNA提取及PCR鉴定 | 第36-38页 |
·转基因油菜Southern blot分析 | 第38-44页 |
·转基因油菜RT-PCR分析 | 第44-46页 |
·蛋白表达水平检测 | 第46-52页 |
第三章 结果与分析 | 第52-71页 |
·油体- 人胰岛素原融合基因(oleosin-mins )植物表达载体op::his-og-mins-2300-twin(op::thom)构建 | 第52-58页 |
·人胰岛素原基因mins设计合成 | 第52-53页 |
·载体构建思路 | 第53-55页 |
·目的片段获得与连接 | 第55-56页 |
·双元双边界表达载体op::thom鉴定 | 第56-57页 |
·工程菌EHA105 制备 | 第57-58页 |
·油菜的遗传转化 | 第58-60页 |
·Kan筛选压确定 | 第58-59页 |
·油菜遗传转化 | 第59-60页 |
·转基因油菜PCR检测 | 第60-61页 |
·转基因油菜Southern blot分析 | 第61-62页 |
·转基因油菜RT-PCR分析 | 第62-65页 |
·转基因油菜外源蛋白翻译水平检测 | 第65-71页 |
·转基因油菜种子总蛋白及油体蛋白测定 | 第65-67页 |
·转基因油菜种子靶蛋白表达Western blot分析 | 第67-69页 |
·转基因油菜种子靶蛋白ELISA检测 | 第69-71页 |
第四章 小结和讨论 | 第71-75页 |
·小结 | 第71页 |
·讨论 | 第71-75页 |
·载体与基因设计 | 第71-72页 |
·选择油菜作为表达系统的意义 | 第72-73页 |
·油菜油体系统表达胰岛素原利弊 | 第73-74页 |
·后续研究工作 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-79页 |
附录一 溶液的配制 | 第79-81页 |
附录二 英文缩略词表 | 第81-83页 |
附录三 主要生物试剂 | 第83-85页 |
附录四 溶液与培养基配方 | 第85-87页 |
附录五 主要仪器设备 | 第87-88页 |
附录六 攻读硕士期间发表论文与参与课题 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |