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玉米组蛋白去乙酰化酶ZmHDA101调控籽粒大小的分子机制研究

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第9-25页
    1.1 玉米籽粒发育研究进展第9-17页
        1.1.1 玉米胚发育的分子调控机理研究第9-11页
        1.1.2 玉米胚乳发育的分子调控机理研究第11-17页
    1.2 种子发育的表观遗传调控机理研究第17-24页
        1.2.1 DNA甲基化参与植物种子发育基因的表达调控第17-20页
        1.2.2 组蛋白修饰参与调控种子发育的分子调控机理第20-24页
    1.3 立论依据、研究目标及研究内容第24-25页
第二章 实验材料和方法第25-49页
    2.1 实验材料第25-26页
        2.1.1 植物材料和种植第25页
        2.1.2 菌株及载体第25页
        2.1.3 常用分子生物学和生物化学试剂及耗材第25-26页
        2.1.4 抗体第26页
        2.1.5 培养基第26页
        2.1.6 引物第26页
    2.2 实验方法第26-49页
        2.2.1 序列扩增第27-29页
        2.2.2 质粒构建第29-30页
        2.2.3 拟南芥转化第30-31页
        2.2.4 蛋白质原核表达及纯化第31-34页
        2.2.5 籽粒表型和细胞学形态观察第34-35页
        2.2.6 玉米籽粒总蛋白和核蛋白提取第35-36页
        2.2.7 玉米和拟南芥基因组DNA提取第36页
        2.2.8 玉米籽粒总RNA提取和cDNA合成第36-38页
        2.2.9 qPCR分析第38-39页
        2.2.10 ZmHDA101单克隆抗体制备第39页
        2.2.11 免疫印迹实验(Western-blot)第39-40页
        2.2.12 免疫共沉淀实验(Co-IP)第40-42页
        2.2.13 染色体免疫共沉淀实验(ChIP)第42-46页
        2.2.14 酵母双杂实验第46-47页
        2.2.15 ChIP-seq第47页
        2.2.16 RNA-seq第47-49页
第三章 结果与分析第49-68页
    3.1 ZmHDA101单克隆抗体制备第49-50页
        3.1.1 ZmHDA101单克隆抗体制备第49页
        3.1.2 ZmHDA101单克隆抗体特异性检测第49-50页
    3.2 ZmHDA101超表达株系的分子鉴定第50-52页
        3.2.1 ZmHDA101超表达株系籽粒中ZmHDA101蛋白水平检测第50-51页
        3.2.2 ZmHDA101超表达株系籽粒中ZmHDA101基因转录水平检测第51-52页
    3.3 hda101突变体籽粒发育形态变异第52-55页
        3.3.1 突变体籽粒表型和细胞学形态观察第52-53页
        3.3.2 突变体胚乳发育相关基因的表达分析第53-55页
    3.4 ZmHDA101调控靶位点的鉴定第55-59页
        3.4.1 ZmHDA101在全基因组水平的分布第55-57页
        3.4.2 ZmHDA101在不同转录水平的靶基因上的富集分析第57-59页
    3.5 ZmHDA101参与调控靶基因组蛋白乙酰化分析第59-62页
        3.5.1 hda101-1和B73籽粒组蛋白乙酰化检测第59-60页
        3.5.2 ZmHDA101靶基因组蛋白H4K5乙酰化水平变化第60-62页
    3.6 ZmHDA101对靶基因转录水平的调控分析第62-65页
        3.6.1 hda101突变体和B73籽粒的转录组分析第62-63页
        3.6.2 H4K5ac和转录水平都上调的ZmHDA101靶基因的表达模式分析第63-64页
        3.6.3 基因表达和ZmHDA101富集之间的关系第64-65页
    3.7 ZmHDA101互作蛋白的鉴定第65-68页
        3.7.1 ZmHDA101互作蛋白的免疫共沉淀和质谱分析第65-66页
        3.7.2 Zm HDA101和ZmSNL1、ZmNFC103的酵母双杂互作验证第66-68页
第四章 讨论第68-71页
    4.1 ZmHDA101调控玉米籽粒胚乳传递细胞发育并影响籽粒大小第68-69页
    4.2 ZmHDA101通过不同的机制调控转录活跃和不活跃基因第69-70页
    4.3 ZmHDA101与组蛋白乙酰化的关系第70-71页
参考文献第71-81页
致谢第81-83页
附录第83-145页
作者简历第145页

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