| 中文摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 英文缩略词表 | 第19-21页 |
| 引言 | 第21-25页 |
| 第一部分 二维色谱与质谱联合应用分析直肠癌与癌旁组织的差异蛋白 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第25-26页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-28页 |
| 1.2.1 临床样本取材 | 第26页 |
| 1.2.2 提取组织总蛋白及浓度测定 | 第26页 |
| 1.2.3 多肽混合物的制备 | 第26-27页 |
| 1.2.4 联合应用二维色谱和质谱对多肽混合物的分离鉴定 | 第27-28页 |
| 1.2.5 Western-Blot对上调表达蛋白e EF2的鉴定 | 第28页 |
| 2 实验结果 | 第28-33页 |
| 2.1 癌组织二维色谱和质谱联和应用分析结果 | 第28-29页 |
| 2.2 癌旁组织二维色谱和质谱联和应用分析结果 | 第29页 |
| 2.3 癌组织与癌旁组织差异蛋白质的统计分析 | 第29-33页 |
| 2.4 上调表达蛋白e EF2质谱结果 | 第33页 |
| 2.5 上调表达蛋白e EF2 Western-Blot结果 | 第33页 |
| 3 小结 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 第二部分EEF2基因的克隆及表达 | 第36-53页 |
| 技术路线 | 第36-37页 |
| 1 材料和方法 | 第37-47页 |
| 1.1 材料 | 第37-40页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.1.2 细胞株、菌株与载体 | 第38页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第38-39页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第39-40页 |
| 1.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 1.2.1 目的基因合成 | 第40-42页 |
| 1.2.2 原核表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 1.2.2.1 目的片段及载体的双酶切、纯化回收 | 第44页 |
| 1.2.2.2 目的片段与载体的连接 | 第44页 |
| 1.2.3 重组质粒转化大肠杆菌DH5α | 第44-45页 |
| 1.2.3.1 感受态细胞制备 | 第44-45页 |
| 1.2.3.2 重组质粒转化大肠杆菌DH5α | 第45页 |
| 1.2.4 重组克隆的筛选和鉴定 | 第45页 |
| 1.2.5 重组p ET30a-e EF2融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达及检测 | 第45-46页 |
| 1.2.5.1 重组子转化大肠杆菌BL21 | 第45-46页 |
| 1.2.5.2 诱导表达 | 第46页 |
| 1.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-51页 |
| 2.1 e EF2目的基因片段及p ET30a载体的电泳结果 | 第47-48页 |
| 2.2 重组质粒p ET30a-e EF2测序鉴定 | 第48-49页 |
| 2.3 p ET30a-e EF2在大肠杆菌中的诱导表达 | 第49-51页 |
| 3 小结 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第三部分EEF2单克隆抗体制备 | 第53-73页 |
| 技术路线 | 第53-54页 |
| 1 材料和方法 | 第54-64页 |
| 1.1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第54-55页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第55页 |
| 1.1.3 实验动物及细胞系 | 第55页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第55-56页 |
| 1.1.4.1 ELISA相关试剂配制 | 第55-56页 |
| 1.1.4.2 细胞培养与融合相关试剂配制 | 第56页 |
| 1.1.4.3 抗体纯化层析液试剂配制 | 第56页 |
| 1.2 实验方法 | 第56-64页 |
| 1.2.1 免疫小鼠 | 第56-57页 |
| 1.2.2 小鼠血清抗体效价测定 | 第57页 |
| 1.2.3 杂交瘤细胞制备 | 第57-58页 |
| 1.2.4 阳性克隆筛选 | 第58页 |
| 1.2.5 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第58-59页 |
| 1.2.6 杂交瘤细胞诱导腹水 | 第59页 |
| 1.2.7 腹水抗体纯化 | 第59页 |
| 1.2.8 抗体检测 | 第59-64页 |
| 1.2.8.1 抗体亚型分析 | 第59-60页 |
| 1.2.8.2 抗体效价检测(间接ELISA法) | 第60页 |
| 1.2.8.3 配对抗体的筛选 | 第60-61页 |
| 1.2.8.4 抗体纯度SDS-PAGE检测 | 第61-62页 |
| 1.2.8.5 Western-Blot鉴定抗e EF2单克隆抗体特异性 | 第62-63页 |
| 1.2.8.6 抗体免疫组化检测 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-70页 |
| 2.1 小鼠血清抗体效价检测结果 | 第64-65页 |
| 2.2 融合细胞筛选结果 | 第65-66页 |
| 2.3 亚克隆及建株 | 第66-67页 |
| 2.4 抗体相关检测 | 第67-70页 |
| 2.4.1 抗体亚型鉴定结果 | 第67页 |
| 2.4.2 抗体效价检测结果 | 第67-68页 |
| 2.4.3 配对抗体的筛选结果 | 第68页 |
| 2.4.4 抗体纯度SDS-PAGE检测结果 | 第68页 |
| 2.4.5 Western-Blot鉴定抗e EF2单克隆抗体特异性 | 第68-69页 |
| 2.4.6 抗体免疫组织化学检测结果 | 第69-70页 |
| 3 小结 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 第四部分：EEF2在肿瘤患者血清中的表达 | 第73-94页 |
| 1 材料和方法 | 第73-76页 |
| 1.1 材料 | 第73-74页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第73页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第73-74页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第74页 |
| 1.2 实验方法 | 第74-76页 |
| 1.2.1 临床标本收集 | 第74-75页 |
| 1.2.2 血清标本e EF2检测 | 第75页 |
| 1.2.3血清标本p-e EF2检测 | 第75页 |
| 1.2.4 统计学分析： | 第75-76页 |
| 2 结果 | 第76-91页 |
| 2.1 ELISA检测结果 | 第76-82页 |
| 2.2 SPSS软件统计学分析结果 | 第82-91页 |
| 2.3 统计分析结果 | 第91页 |
| 3 小结 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 文献综述 真核延伸因子2与肿瘤 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 附录 | 第108-124页 |
| 附录一 上调表达蛋白EEF2鉴定质谱数据 | 第108-119页 |
| 附录二：重组质粒测序图 | 第119-124页 |
| 作者简介 | 第124-125页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
