| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-33页 |
| 1.1 生物钟的相关概念 | 第10-11页 |
| 1.2 生物钟分子机制的研究概况 | 第11-25页 |
| 1.2.1 生物钟分子机制的提出 | 第12-14页 |
| 1.2.2 哺乳动物生物钟的分子机制 | 第14-17页 |
| 1.2.3 其他模式生物的生物钟分子机制 | 第17-25页 |
| 1.3 哺乳动物生物钟与机体生命活动的相互调节 | 第25-26页 |
| 1.4 哺乳动物生物钟周期的调控 | 第26-32页 |
| 1.4.1 PER基因对哺乳动物生物钟周期的调控 | 第26-29页 |
| 1.4.2 CRY基因对哺乳动物生物钟周期的调控 | 第29-30页 |
| 1.4.3 其他因素对哺乳动物生物钟周期的调控 | 第30-32页 |
| 1.5 本论文的研究目的及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-50页 |
| 2.1 主要实验仪器与试剂 | 第33-36页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第34-36页 |
| 2.2 实验所用细胞、菌株、cDNA、质粒载体及溶液配制 | 第36-41页 |
| 2.2.1 细胞来源及培养条件 | 第36页 |
| 2.2.2 菌株来源 | 第36页 |
| 2.2.3 cDNA及质粒载体来源 | 第36-37页 |
| 2.2.4 实验相关溶液配制 | 第37-41页 |
| 2.3 分子生物学相关操作 | 第41-47页 |
| 2.3.1 PCR(聚合酶链式反应)反应 | 第41页 |
| 2.3.2 PCR产物的胶回收 | 第41-42页 |
| 2.3.3 酶切反应 | 第42页 |
| 2.3.4 DNA连接反应 | 第42页 |
| 2.3.5 感受态的制备及转化 | 第42-43页 |
| 2.3.6 质粒定点突变 | 第43-44页 |
| 2.3.7 无内毒素质粒小量提取 | 第44-45页 |
| 2.3.8 RNA提取 | 第45页 |
| 2.3.9 RNA反转录及荧光定量PCR操作 | 第45-46页 |
| 2.3.10 Western Blot(免疫印迹)操作 | 第46页 |
| 2.3.11 IP(免疫沉淀)操作 | 第46-47页 |
| 2.4 细胞系构建及细胞实验 | 第47-50页 |
| 2.4.1 DKO细胞生物钟节律恢复实验 | 第47页 |
| 2.4.2 双荧光素酶报告实验 | 第47-48页 |
| 2.4.3 慢病毒包装 | 第48页 |
| 2.4.4 稳定细胞系建立 | 第48页 |
| 2.4.5 GPS蛋白稳定性实验 | 第48-49页 |
| 2.4.6 蛋白入核速率的测定 | 第49-50页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第50-90页 |
| 3.1 哺乳动物生物钟基因的表达模式 | 第50-52页 |
| 3.2 哺乳动物主要生物钟基因在蛋白水平的稳定性研究 | 第52-54页 |
| 3.3 CRY蛋白在生物钟负反馈环路中的重要作用 | 第54-55页 |
| 3.4 CRY1基因与CRY2基因在生物钟中的不同功能 | 第55-61页 |
| 3.4.1 P(CRY1)启动子驱动下CRY1基因与CRY2基因抑制活性的比较 | 第57-60页 |
| 3.4.2 CRY2基因在细胞水平表现出短周期的生物钟节律 | 第60-61页 |
| 3.5 细胞内表达的CRY2蛋白比CRY1蛋白更稳定 | 第61-64页 |
| 3.6 蛋白N端序列的差异和赖氨酸残基突变导致CRY蛋白稳定性的差异 | 第64-68页 |
| 3.7 CRY2蛋白的稳定性不影响生物钟的周期 | 第68-69页 |
| 3.8 CRY蛋白的C端序列决定了生物钟的周期长度 | 第69-71页 |
| 3.9 CRY蛋白的C端序列使CRY蛋白的PHR结构域更加稳定 | 第71-73页 |
| 3.10 CRY蛋白的C端序列影响CRY蛋白在细胞中定位 | 第73-74页 |
| 3.11 CRY蛋白的C端序列通过入核速率决定生物钟的周期 | 第74-80页 |
| 3.12 CRY1基因与CRY2基因共同维持细胞的生物钟节律 | 第80-82页 |
| 3.13 CRY蛋白与PER蛋白在同一个功能复合体中 | 第82-85页 |
| 3.14 CRY蛋白泛转录抑制活性的机制研究 | 第85-90页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第90-95页 |
| 4.1 结论 | 第90页 |
| 4.2 讨论 | 第90-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 个人简介 | 第107页 |
