摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
缩略语表 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-18页 |
1.1 松褐天牛简介 | 第12-13页 |
1.1.1 松褐天牛的发生规律及危害 | 第12页 |
1.1.2 松褐天牛生物学特性 | 第12页 |
1.1.3 松褐天牛的防治 | 第12-13页 |
1.2 植物挥发性物质与昆虫对挥发物的嗅觉反应 | 第13-14页 |
1.2.1 植物挥发性物质 | 第13页 |
1.2.2 昆虫对挥发物的嗅觉反应 | 第13-14页 |
1.3 气味结合蛋白 | 第14-16页 |
1.3.1 昆虫嗅觉作用机制 | 第14页 |
1.3.2 气味结合蛋白分类 | 第14-15页 |
1.3.3 气味结合蛋白功能 | 第15页 |
1.3.4 气味结合蛋白结合和释放机制 | 第15-16页 |
1.4 研究目的与意义 | 第16-17页 |
技术路线 | 第17-18页 |
第二章 松褐天牛气味结合蛋白(MaltOBPs)基因克隆 | 第18-27页 |
2.1 材料与方法 | 第18-23页 |
2.1.1 供试昆虫 | 第18页 |
2.1.2 实验试剂及试剂盒 | 第18页 |
2.1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
2.1.4 松褐天牛cDNA的获取 | 第19-20页 |
2.1.5 松褐天牛MaltOBPs基因的克隆 | 第20-23页 |
2.2 结果分析 | 第23-26页 |
2.2.1 松褐天牛触角总RNA提取质量检测 | 第23页 |
2.2.2 松褐天牛MaltOBPs基因信息 | 第23-24页 |
2.2.3 松褐天牛MaltOBPs基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
2.2.4 松褐天牛MaltOBPs基因克隆 | 第25-26页 |
2.3 讨论 | 第26-27页 |
第三章 松褐天牛OBPs基因时空表达特性检测 | 第27-36页 |
3.1 材料与方法 | 第27-30页 |
3.1.1 实验材料 | 第27-28页 |
3.1.2 样品RNA的提取 | 第28页 |
3.1.3 cDNA第一条链的合成 | 第28-29页 |
3.1.4 引物设计及合成 | 第29-30页 |
3.1.5 PCR反应 | 第30页 |
3.1.6 数据分析 | 第30页 |
3.2 结果和分析 | 第30-33页 |
3.2.1 引物扩增效率和特异性检测 | 第30-31页 |
3.2.2 松褐天牛气味结合蛋白基因时空表达特性分析 | 第31-33页 |
3.3 讨论 | 第33-36页 |
第四章 松褐天牛MaltOBPs表达纯化及结合特性 | 第36-52页 |
4.1 材料与方法 | 第36-44页 |
4.1.1 主要菌株、试剂盒和试剂 | 第36-37页 |
4.1.2 荧光结合气味物质 | 第37-38页 |
4.1.3 主要仪器 | 第38页 |
4.1.4 质粒提取 | 第38-39页 |
4.1.5 原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
4.1.6 融合蛋白试表达 | 第40页 |
4.1.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第40页 |
4.1.8 融合蛋白表达条件优化和融合蛋白大量表达 | 第40页 |
4.1.9 试表达成功的融合蛋白的纯化 | 第40-42页 |
4.1.10 蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
4.1.11 荧光探针适合性测定 | 第43页 |
4.1.12 荧光竞争结合实验 | 第43页 |
4.1.13 荧光竞争结合实验数据分析 | 第43-44页 |
4.2 结果与分析 | 第44-50页 |
4.2.1 重组质粒的构建 | 第44页 |
4.2.2 原核表达 | 第44-46页 |
4.2.3 蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
4.2.4 松褐天牛MaltOBP13与荧光探针 1-NPN适合性检验 | 第47页 |
4.2.5 MaltOBP13蛋白与松树挥发物的结合特性 | 第47-50页 |
4.3 讨论 | 第50-52页 |
第五章 松褐天牛成虫行为选择 | 第52-57页 |
5.1 材料与方法 | 第52-54页 |
5.1.1 供试昆虫 | 第52页 |
5.1.2 供试试剂和仪器 | 第52-53页 |
5.1.3 Y型嗅觉仪行为选择 | 第53-54页 |
5.1.4 数据统计分析 | 第54页 |
5.2 结果与分析 | 第54-55页 |
5.3 讨论 | 第55-57页 |
第六章 结果与展望 | 第57-59页 |
6.1 主要结果 | 第57页 |
6.2 展望 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-68页 |
硕士期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |