摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5页 |
引言 | 第9-20页 |
0.1 概述 | 第9-10页 |
0.2 阿尔茨海默病 | 第10-12页 |
0.2.1 阿尔茨海默病的症状 | 第10页 |
0.2.2 阿尔茨海默病的病理表现 | 第10-11页 |
0.2.3 阿尔茨海默病的发病机制 | 第11-12页 |
0.2.4 阿尔茨海默病的治疗方法 | 第12页 |
0.3 DHCR24 | 第12-16页 |
0.3.1 DHCR24的发现 | 第12-13页 |
0.3.2 DHCR24通过合成胆固醇发挥其生理作用 | 第13-16页 |
0.4 基因治疗 | 第16-17页 |
0.5 组织特异性表达 | 第17-18页 |
0.5.1 组织特异性表达的概念 | 第17-18页 |
0.5.2 SYN1启动子介导神经细胞特异性表达 | 第18页 |
0.6 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
第一章 神经特异表达DHCR24的重组腺病毒及功能验证 | 第20-36页 |
1.1 引言 | 第20页 |
1.2 材料 | 第20-22页 |
1.2.1 菌种和载体 | 第20-21页 |
1.2.2 工具酶和生化试剂 | 第21页 |
1.2.3 主要仪器和设备 | 第21-22页 |
1.2.4 培养基与溶液的配制 | 第22页 |
1.3 实验方法 | 第22-36页 |
1.3.1 实验设计与流程 | 第22-25页 |
1.3.2 模板及引物设计 | 第25页 |
1.3.3 PCR扩增SYN1序列 | 第25-26页 |
1.3.4 重组质粒真核表达载体的构建 | 第26-31页 |
1.3.5 重组质粒的同源重组 | 第31-32页 |
1.3.6 重组质粒转染293细胞 | 第32页 |
1.3.7 重组腺病毒鉴定 | 第32-33页 |
1.3.8 Western Blot | 第33-34页 |
1.3.9 重组病毒的纯化 | 第34-35页 |
1.3.10 重组腺病毒的神经特异性表达检验 | 第35页 |
1.3.11 重组腺病毒的抗氧化应激的细胞保护作用 | 第35-36页 |
第二章 实验结果 | 第36-44页 |
2.1 SYN1基因序列的获得 | 第36页 |
2.2 重组质粒pGEMT-easy/SYN1鉴定 | 第36-39页 |
2.3 pcDNA3.1A-SYN1-DHCR24-myc的构建及双酶切验证 | 第39页 |
2.4 pShttule-SYN1-DHCR24质粒双酶切验证 | 第39-40页 |
2.5 pAdEasy-1-SYN1-DHCR24同源重组质粒的重组及验证 | 第40-41页 |
2.6 重组腺病毒的包装、蛋白提取和DHCR24蛋白表达的验证 | 第41-42页 |
2.7 重组腺病毒的扩增、提纯及DHCR24蛋白神经特异性表达的验证 | 第42页 |
2.8 Ad-hSYN-DHCR24重组腺病毒的抗氧化应激的神经细胞保护作用 | 第42-44页 |
第三章 讨论与结论 | 第44-46页 |
致谢 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-50页 |
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第50页 |