| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 李斯特菌概述 | 第10-11页 |
| 2 单增李斯特菌的感染机制 | 第11-12页 |
| 3 单增李斯特菌吞噬逃逸因子 | 第12-13页 |
| 4 单增李斯特菌溶血素LLO研究进展 | 第13-14页 |
| 5 丝裂原蛋白活化激酶MAPK信号通路 | 第14-16页 |
| 5.1 MAPK信号通路亚族成员 | 第14-15页 |
| 5.2 病原微生物感染与MAPK信号通路 | 第15-16页 |
| 第二部分 试验研究 | 第16-54页 |
| 第一章 单增李斯特菌溶血素LLO蛋白关键氨基酸位点研究 | 第17-25页 |
| 1 材料与方法 | 第17-21页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第17-18页 |
| 1.2 试剂订购 | 第18页 |
| 1.3 仪器及型号 | 第18页 |
| 1.4 试剂配制 | 第18-19页 |
| 1.5 LLO及其突变体重组蛋白的表达及纯化 | 第19-21页 |
| 1.6 重组蛋白溶血活性测定 | 第21页 |
| 1.6.1 5%绵羊血细胞的配制 | 第21页 |
| 1.6.2 溶血活性测定方法 | 第21页 |
| 2 试验结果 | 第21-23页 |
| 2.1 LLO及其氨基酸位点突变体蛋白的表达与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2 LLO及其氨基酸位点突变蛋白的溶血活性分析 | 第22-23页 |
| 3 讨论 | 第23-25页 |
| 第二章 单增李斯特菌LLO关键氨基酸位点生物学功能研究 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第25页 |
| 1.2 质粒、酶及试剂盒 | 第25页 |
| 1.3 试验耗材及仪器 | 第25页 |
| 1.4 试剂配制 | 第25-26页 |
| 1.5 E.coli感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 1.6 hly回补株的构建 | 第26-29页 |
| 1.7 hly点突变质粒及回补株的构建 | 第29-30页 |
| 1.8 hly突变株体外生长能力试验 | 第30-31页 |
| 1.9 hly回补株蛋白表达水平验证 | 第31-32页 |
| 1.9.1 菌体蛋白样品制备 | 第31页 |
| 1.9.2 Western blot试验 | 第31-32页 |
| 1.10 溶血活性测定 | 第32页 |
| 2 试验结果 | 第32-34页 |
| 2.1 成功构建hly重组质粒及其回补株 | 第32-33页 |
| 2.2 Western blot分析hly回补株蛋白水平的表达 | 第33页 |
| 2.3 hly的缺失及N478V479位点突变不显著影响菌株的生长能力 | 第33页 |
| 2.4 CΔhlyN478AV479A菌株上清液分泌的LLO无溶血活性 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 单增李斯特菌CΔhlyN478AV479A感染致病生物学研究 | 第36-49页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 1.1 细胞种类及培养条件 | 第36页 |
| 1.2 试剂及仪器设备 | 第36-37页 |
| 1.3 试验方法 | 第37-40页 |
| 1.3.1 LDH毒性试验 | 第37页 |
| 1.3.2 巨噬细胞胞内增殖试验 | 第37-38页 |
| 1.3.3 空斑试验 | 第38-39页 |
| 1.3.4 细胞内定位试验 | 第39页 |
| 1.3.5 小鼠脏器增殖试验 | 第39-40页 |
| 1.3.6 小鼠毒性试验 | 第40页 |
| 2 试验结果 | 第40-47页 |
| 2.1 CΔhlyN478AV479A对宿主细胞造成细胞毒性 | 第40-41页 |
| 2.2 CΔhlyN478AV479A不影响在巨噬细胞内的增殖效率 | 第41-43页 |
| 2.3 CΔhlyN478AV479A不显著影响细胞间传播能力 | 第43-44页 |
| 2.4 CΔhlyN478AV479A不影响细胞间迁移能力 | 第44-45页 |
| 2.5 CΔhlyN478AV479A对小鼠毒力显著减弱 | 第45-46页 |
| 2.6 CΔhlyN478AV479A削弱小鼠脏器内增殖能力 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 单增李斯特菌依赖LLO激活ERK1/2 及p38信号通路 | 第49-54页 |
| 1 材料与方法 | 第49-50页 |
| 1.1 菌株、细胞及培养条件 | 第49页 |
| 1.2 试剂及仪器设备 | 第49页 |
| 1.3 试验方法 | 第49-50页 |
| 1.3.1 细胞感染与总蛋白提取 | 第49-50页 |
| 1.3.2 Western blot分析MAPK相关信号分子 | 第50页 |
| 2 试验结果 | 第50-52页 |
| 2.1 单增李斯特菌感染细胞后能激活ERK1/2 及p38信号通路 | 第50-51页 |
| 2.2 单增李斯特菌依赖溶血素LLO激活ERK1/2 及p38信号通路 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 结论与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录Ⅰ 中英文对照表 | 第62-63页 |
| 附录Ⅱ 试验所需引物 | 第63-64页 |
| 个人简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
