| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 第一章 前言 | 第18-28页 |
| 1.1 HER2蛋白在胃癌中的表达 | 第18-19页 |
| 1.2 曲妥珠单抗在胃癌治疗中的现状 | 第19-21页 |
| 1.3 曲妥珠单抗耐药的产生及相应机制 | 第21-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-47页 |
| 2.1 材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验试剂及耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第29页 |
| 2.1.3 实验细胞 | 第29-30页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第30-31页 |
| 2.2 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第31页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第31页 |
| 2.2.3 细胞传代 | 第31-32页 |
| 2.2.4 细胞冻存 | 第32页 |
| 2.3 MTT法检测曲妥珠单抗的抑制率 | 第32-33页 |
| 2.3.1 检测原理 | 第32-33页 |
| 2.3.2 具体实验步骤 | 第33页 |
| 2.4 曲妥珠单抗耐药细胞NCI-N87/TR的诱导建立 | 第33-34页 |
| 2.4.1 耐药细胞的诱导建立 | 第33-34页 |
| 2.4.2 耐药指数的计算 | 第34页 |
| 2.5 Western blot法检测蛋白表达 | 第34-36页 |
| 2.5.1 溶液的配制 | 第34-35页 |
| 2.5.2 Western-blot的具体步骤 | 第35-36页 |
| 2.6 QRT-PCR检测基因表达 | 第36-37页 |
| 2.7 siRNA靶向干扰PI3K | 第37-38页 |
| 2.7.1 细胞铺板 | 第37页 |
| 2.7.2 lipo2000转染 | 第37-38页 |
| 2.8 PTEN基因转染 | 第38-46页 |
| 2.8.1 载体质粒DNA的分析 | 第38-39页 |
| 2.8.2 引物合成 | 第39页 |
| 2.8.3 PTEN基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.8.4 PCR产物的纯化 | 第40页 |
| 2.8.5 表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.8.6 DH5α感受态的制备 | 第42-43页 |
| 2.8.7 菌落PCR鉴定 | 第43页 |
| 2.8.8 酶切鉴定 | 第43页 |
| 2.8.9 测序 | 第43页 |
| 2.8.10 质粒的抽提 | 第43-45页 |
| 2.8.11 细胞株培养 | 第45页 |
| 2.8.12 细胞分组 | 第45页 |
| 2.8.13 细胞瞬时转染 | 第45-46页 |
| 2.9 统计学分析 | 第46-47页 |
| 第三章 研究结果 | 第47-54页 |
| 3.1 HER2阳性人胃癌细胞株的筛选 | 第47页 |
| 3.2 人胃癌曲妥珠单抗耐药细胞的诱导 | 第47-48页 |
| 3.3 耐药细胞对化疗药物的交叉耐药 | 第48-49页 |
| 3.4 耐药株中AKT/p-AKT及PTEN基因和(或)蛋白的表达 | 第49-50页 |
| 3.4.1 实时定量PCR法检测PTEN mRNA表达水平改变 | 第49页 |
| 3.4.2 Western-blot检测AKT/p-AKT、PTEN的蛋白表达情况 | 第49-50页 |
| 3.5 PI3K/AKT信号通路的活化与曲妥珠单抗耐药的关系 | 第50-52页 |
| 3.5.1 PI3K抑制剂 LY294002抑制PI3K | 第50-51页 |
| 3.5.2 siRNA靶向干扰PI3K | 第51-52页 |
| 3.6 PTEN基因转染的研究 | 第52-54页 |
| 3.6.1 pBabe-puro-PTEN载体质粒的构建及转染 | 第52页 |
| 3.6.2 PTEN基因转染后,PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 攻读硕士学位期间的成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
