| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 研究背景 | 第10-41页 |
| 一、上皮-间质转换的研究进展 | 第10-21页 |
| （一）上皮-间质转换简介 | 第10-14页 |
| （二）EMT的调控机制 | 第14-21页 |
| 二、EMT与乳腺癌的关系 | 第21-27页 |
| （一）EMT与临床乳腺癌样本的关系 | 第22-23页 |
| （二）EMT与乳腺癌转移的关系 | 第23-25页 |
| （三）EMT与乳腺癌干细胞的关系 | 第25-27页 |
| 三、细胞衰老 | 第27-33页 |
| （一）细胞衰老简介 | 第27-28页 |
| （二）细胞衰老的抑癌作用 | 第28-31页 |
| （三）细胞衰老与EMT的相关性 | 第31-33页 |
| 四、精氨酸甲基转移酶PRMT1的研究进展 | 第33-39页 |
| （一）精氨酸甲基转移酶PRMTs家族简介 | 第33-35页 |
| （二）PRMT1简介 | 第35-38页 |
| （三）PRMT1和乳腺癌的关系 | 第38-39页 |
| 五、本论文研究内容及意义 | 第39-41页 |
| （一）立题依据 | 第39页 |
| （二）研究内容及意义 | 第39-41页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第41-61页 |
| 一、实验材料 | 第41-45页 |
| （一）实验仪器 | 第41-42页 |
| （二）试剂 | 第42-43页 |
| （三）试剂盒 | 第43页 |
| （四）抗体 | 第43-44页 |
| （五）质粒 | 第44-45页 |
| （六）细胞系 | 第45页 |
| 二、实验方法 | 第45-61页 |
| Ⅰ、分子生物学实验方法 | 第45-54页 |
| （一）表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| （二）干涉质粒的构建 | 第46页 |
| （三） 质粒提取 | 第46-47页 |
| （四）总RNA提取、反转录和Real-time PCR | 第47-49页 |
| （五）免疫印迹（Western blot） | 第49-51页 |
| （六）免疫荧光（Immunofluorescence，IF） | 第51页 |
| （七）染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation，Ch IP） | 第51-54页 |
| Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第54-60页 |
| （一） 细胞培养 | 第54页 |
| （二） 细胞瞬时转染 | 第54-55页 |
| （三） 慢病毒的包装和侵染 | 第55-56页 |
| （四）细胞划痕实验 | 第56页 |
| （五）细胞迁移和侵袭实验 | 第56页 |
| （六）明胶酶谱实验 | 第56-58页 |
| （七）MTT细胞活性检测 | 第58页 |
| （八）Brd U掺入实验 | 第58页 |
| （九）衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色实验 | 第58-59页 |
| （十）乳腺微球体（mammosphere）形成实验 | 第59页 |
| （十一）流式细胞术 | 第59-60页 |
| Ⅲ、临床病理及活体实验 | 第60页 |
| （一）体外小鼠转移实验 | 第60页 |
| （二）冰冻切片制作 | 第60页 |
| （三）苏木精-伊红染色（HE） | 第60页 |
| Ⅳ、统计分析 | 第60-61页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第61-81页 |
| 一、过表达PRMT1诱导乳腺癌细胞发生EMT | 第61-65页 |
| （一）PRMT1在转移能力强的乳腺癌细胞系中高表达 | 第61页 |
| （二）过表达PRMT1诱导乳腺上皮细胞MCF10A发生EMT | 第61-64页 |
| （三）干涉PRMT1部分逆转EMT | 第64-65页 |
| 二、PRMT1促进乳腺癌细胞迁移和侵袭 | 第65-70页 |
| （一）过表达PRMT1增强MCF10A细胞的迁移和侵袭能力 | 第65-67页 |
| （二）干涉PRMT1减弱乳腺癌细胞在细胞水平及小鼠体内的迁移和侵袭能力 | 第67-70页 |
| 三、PRMT1诱导的EMT使MCF10A细胞获得干细胞特性 | 第70-71页 |
| 四、干涉PRMT1使乳腺癌细胞生长停滞并衰老 | 第71-75页 |
| （一）干涉PRMT1使乳腺癌细胞生长停滞 | 第71-73页 |
| （二）干涉PRMT1使乳腺癌细胞衰老 | 第73-75页 |
| 五、PRMT1通过组蛋白H4R3非对称性二甲基化修饰调控ZEB1的表达 | 第75-77页 |
| （一）PRMT1与ZEB1的表达正相关 | 第75-76页 |
| （二）PRMT1通过H4R3me2as修饰激活ZEB1的表达 | 第76-77页 |
| 六、ZEB1对PRMT1所介导的EMT及其相关功能是必需的 | 第77-81页 |
| （一）ZEB1对PRMT1所介导的EMT过程是必需的 | 第77-78页 |
| （二）ZEB1对PRMT1所介导的细胞迁移和侵袭能力是必需的 | 第78-79页 |
| （三）干涉ZEB1影响PRMT1所介导的干细胞特性 | 第79-81页 |
| 第四部分 讨论 | 第81-84页 |
| 一、PRMT1V1和PRMT1V2调控机制的不同 | 第81页 |
| 二、PRMT1调控EMT的其他机制 | 第81-82页 |
| 三、PRMT1的下调所诱导的细胞衰老 | 第82页 |
| 四、PRMT1连接EMT与细胞衰老 | 第82-83页 |
| 五、PRMT1所诱导的干细胞特性 | 第83-84页 |
| 主要结论和创新点 | 第84-85页 |
| 一、主要结论 | 第84页 |
| 二、创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-106页 |
| 英文缩略词一览表 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第109页 |
