| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1. 前言 | 第16-40页 |
| 1.1. 拟南芥花药的发育 | 第16-18页 |
| 1.2. 拟南芥的花粉壁 | 第18-21页 |
| 1.2.1. 成熟花粉的花粉壁结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2. 花粉外壁的发育 | 第19-20页 |
| 1.2.3. 花粉外壁的功能 | 第20-21页 |
| 1.3. 绒毡层 | 第21-26页 |
| 1.3.1. 绒毡层的发育 | 第21-22页 |
| 1.3.2. 绒毡层的功能 | 第22-23页 |
| 1.3.3. 影响绒毡层发育的基因 | 第23-25页 |
| 1.3.4. 绒毡层为孢粉素和含油层的形成提供了前体物质 | 第25-26页 |
| 1.4. 影响花粉外壁发育的因素 | 第26-38页 |
| 1.4.1. 胼胝质 | 第26-28页 |
| 1.4.2. 原外壁 | 第28-32页 |
| 1.4.3. 孢粉素 | 第32-38页 |
| 1.5. 本研究的目的、意义和内容 | 第38-40页 |
| 2. 烟草NtZC8基因的克隆和初步分析 | 第40-60页 |
| 2.1. 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.1.1. 植物材料和所用文库、菌株 | 第40页 |
| 2.1.2. 主要试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.3. 实验仪器 | 第41页 |
| 2.2. 实验方法 | 第41-52页 |
| 2.2.1. SR1合子cDNA文库中筛选NtZC8基因 | 第41-46页 |
| 2.2.2. NtZC8基因cDNA序列的校正 | 第46-49页 |
| 2.2.3. NtZC8的生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 2.2.4. NtZC8在烟草中的表达模式 | 第50-52页 |
| 2.3. 实验结果 | 第52-57页 |
| 2.3.1. 烟草NtZC8基因cDNA全长的克隆 | 第52-55页 |
| 2.3.2. NtZC8 cDNA序列的验证 | 第55页 |
| 2.3.3. NtZC8的生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 2.3.4. NtZC8基因的表达模式 | 第56-57页 |
| 2.4. 讨论 | 第57-60页 |
| 2.4.1. NtZC8基因功能的推测 | 第57-58页 |
| 2.4.2. PCR筛库方式的优越性 | 第58-60页 |
| 3. 拟南芥中候选基因的初步分析 | 第60-68页 |
| 3.1. 实验材料 | 第60页 |
| 3.1.1. 植物材料 | 第60页 |
| 3.1.2. 主要试剂 | 第60页 |
| 3.2. 实验方法 | 第60-62页 |
| 3.2.1. 拟南芥中候选基因生物信息学分析 | 第60-61页 |
| 3.2.2. 拟南芥各组织总RNA的提取 | 第61页 |
| 3.2.3. 目标基因的检测 | 第61-62页 |
| 3.3. 实验结果 | 第62-65页 |
| 3.3.1. 拟南芥中候选基因生物信息学分析 | 第62-64页 |
| 3.3.2. 拟南芥中候选基因的表达模式 | 第64-65页 |
| 3.4. 小结和讨论 | 第65-68页 |
| 4. EFD基因的表达、结构和进化分析 | 第68-94页 |
| 4.1. 实验材料 | 第68-70页 |
| 4.1.1. 植物材料、质粒载体和菌株 | 第68页 |
| 4.1.2. 本研究所用的引物 | 第68-69页 |
| 4.1.3. 实验试剂 | 第69-70页 |
| 4.2. 实验方法 | 第70-83页 |
| 4.2.1. pCAMBIA1302载体的改造 | 第70-72页 |
| 4.2.2. EFD启动子和cDNA融合片段的克隆 | 第72-73页 |
| 4.2.3. EFD-GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第73-75页 |
| 4.2.4. 洋葱表皮细胞转化和荧光观察 | 第75-76页 |
| 4.2.5. EFD启动子驱动GUS表达载体的构建 | 第76-78页 |
| 4.2.6. EFD启动子驱动GUS表达载体转化拟南芥 | 第78-80页 |
| 4.2.7. 拟南芥转基因植株的筛选 | 第80-81页 |
| 4.2.8. P_(EFD)：：GUS转基因植株中GUS信号的检测 | 第81-83页 |
| 4.2.9. EFD蛋白的甲基化转移酶类型分析 | 第83页 |
| 4.2.10. EFD基因的进化分析 | 第83页 |
| 4.3. 实验结果 | 第83-92页 |
| 4.3.1. EFD启动子和cDNA融合片段的克隆 | 第83-84页 |
| 4.3.2. EFD-sGFP瞬时转化载体的检测 | 第84页 |
| 4.3.3. EFD蛋白的亚细胞定位 | 第84-85页 |
| 4.3.4. PEFD：：GUS转基因植株筛选 | 第85-87页 |
| 4.3.5. EFD在拟南芥中的表达模式 | 第87-89页 |
| 4.3.6. EFD蛋白的甲基化转移酶类型分析 | 第89-90页 |
| 4.3.7. EFD蛋白的进化分析 | 第90-92页 |
| 4.4. 小结和讨论 | 第92-94页 |
| 5. efd突变体的表型分析 | 第94-122页 |
| 5.1. 实验材料 | 第94页 |
| 5.2. 实验方法 | 第94-101页 |
| 5.2.1. efd突变体基因型鉴定 | 第94-95页 |
| 5.2.2. efd突变体插入位点检测 | 第95-96页 |
| 5.2.3. efd突变体纯合子中EFD基因表达鉴定 | 第96-97页 |
| 5.2.4. efd不育表型的观察 | 第97页 |
| 5.2.5. EFD功能补偿实验 | 第97-98页 |
| 5.2.6. efd的角果发育 | 第98页 |
| 5.2.7. efd和野生型植株的正反交实验 | 第98页 |
| 5.2.8. 花药和成熟花粉外观观察 | 第98-99页 |
| 5.2.9. 成熟花粉的FDA染色活力检测 | 第99页 |
| 5.2.10. 花粉管的苯胺蓝染色观察 | 第99-100页 |
| 5.2.11. 花粉管的体外萌发 | 第100页 |
| 5.2.12. 花药发育的观察 | 第100页 |
| 5.2.13. 花粉的观察 | 第100-101页 |
| 5.2.14. 成熟花粉表面结构的观察 | 第101页 |
| 5.2.15. 花粉外壁结构的观察 | 第101页 |
| 5.3. 实验结果 | 第101-118页 |
| 5.3.1. efd突变体基因型鉴定 | 第101-102页 |
| 5.3.2. efd突变体插入位点检测 | 第102-103页 |
| 5.3.3. efd中EFD基因表达水平的鉴定 | 第103-104页 |
| 5.3.4. efd的败育表型 | 第104-105页 |
| 5.3.5. efd的育性恢复实验 | 第105-106页 |
| 5.3.6. efd角果发育状况的观察 | 第106-108页 |
| 5.3.7. efd和野生型植株的正反交实验 | 第108-109页 |
| 5.3.8. efd花药和花粉外观观察 | 第109-110页 |
| 5.3.9. efd花粉的活力检测 | 第110-111页 |
| 5.3.10. efd花粉管的染色观察 | 第111-112页 |
| 5.3.11. efd花粉的体外萌发 | 第112-113页 |
| 5.3.12. efd花药观察 | 第113-114页 |
| 5.3.13. efd花粉的形态观察 | 第114-115页 |
| 5.3.14. efd花粉的细胞核观察 | 第115-116页 |
| 5.3.15. efd花粉表面结构的观察 | 第116-117页 |
| 5.3.16. efd花粉外壁发育的观察 | 第117-118页 |
| 5.4. 小结和讨论 | 第118-122页 |
| 5.4.1. EFD对拟南芥雌性生殖系统的发育没有影响 | 第118-119页 |
| 5.4.2. EFD基因调控花粉胼胝质壁的合成 | 第119页 |
| 5.4.3. EFD基因对花粉原外壁的发育十分重要 | 第119-122页 |
| 6. EFD对拟南芥转录组的调控 | 第122-128页 |
| 6.1. 实验材料 | 第122页 |
| 6.2. 实验方法 | 第122-123页 |
| 6.2.1. ATH1芯片数据的获得 | 第122-123页 |
| 6.2.2. 芯片数据的分析 | 第123页 |
| 6.3. 实验结果 | 第123-127页 |
| 6.3.1. efd中的变化基因与花粉和小孢子发育密切相关 | 第123-125页 |
| 6.3.2. EFD调控花粉外壁发育和孢粉素转运 | 第125页 |
| 6.3.3. EFD参与的调控途径与已知花粉外壁发育调控途径的关系 | 第125-127页 |
| 6.4. 小结和讨论 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-142页 |
| 致谢 | 第142页 |
