摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩略词中英文注释表 | 第12-14页 |
第一章 绪论 | 第14-22页 |
1.1 研究背景 | 第14-19页 |
1.1.1 胰腺癌 | 第14页 |
1.1.2 YTH结构域m6A RNA结合蛋白 2(YTHDF2) | 第14-16页 |
1.1.3 上皮间质转化 | 第16-17页 |
1.1.4 增殖与迁移分歧 | 第17-19页 |
1.2 本研究的目的意义、内容、技术路线 | 第19-22页 |
1.2.1 目的意义 | 第19页 |
1.2.2 研究内容 | 第19-20页 |
1.2.3 技术路线图 | 第20-22页 |
第二章 生物信息学分析、载体构建与鉴定、稳转细胞株筛选 | 第22-47页 |
2.1 材料和试剂 | 第22-27页 |
2.1.1 主要材料 | 第22-23页 |
2.1.2 配制试剂 | 第23-25页 |
2.1.3 实验试剂 | 第25-26页 |
2.1.4 主要仪器 | 第26-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-38页 |
2.2.1 细胞复苏、培养及传代: | 第27-28页 |
2.2.2 定量PCR | 第28-30页 |
2.2.3 Western blotting | 第30-32页 |
2.2.4 DH5α/ Stbl3感受态细胞制备方法慢病毒包装 | 第32-33页 |
2.2.5 构建sh-EGFP和sh-YTHDF2载体 | 第33-37页 |
2.2.6 包装病毒 | 第37页 |
2.2.7 筛选稳转细胞 | 第37-38页 |
2.2.8 统计学分析 | 第38页 |
2.3 结果 | 第38-44页 |
2.3.1 正常胰腺组织和胰腺癌组织YTHDF2 mRNA和蛋白表达量的差异 | 第38-39页 |
2.3.2 YTHDF2的表达与胰腺癌分期的联系 | 第39-40页 |
2.3.3 检测YTHDF2 mRNA和蛋白在三种胰腺癌细胞的表达量 | 第40-41页 |
2.3.4 pLKO.1-TRC质粒双酶切及菌液PCR鉴定 | 第41-42页 |
2.3.5 sh-YTHDF2质粒测序结果 | 第42-43页 |
2.3.6 验证sh-YTHDF2质粒的干扰效果 | 第43-44页 |
2.4 讨论 | 第44-47页 |
第三章 YTHDF2对胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭的影响 | 第47-58页 |
3.1 材料和试剂 | 第47-48页 |
3.1.1 主要材料 | 第47页 |
3.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
3.1.3 主要仪器 | 第48页 |
3.2 方法 | 第48-51页 |
3.2.1 细胞复苏、培养及传代 | 第48页 |
3.2.2 Western blotting | 第48页 |
3.2.3 定量PCR | 第48页 |
3.2.4 平板克隆形成实验 | 第48-49页 |
3.2.5 CCK-8 实验 | 第49页 |
3.2.6 Transwell迁移实验 | 第49-50页 |
3.2.7 Transwell侵袭实验 | 第50页 |
3.2.8 细胞划痕实验 | 第50页 |
3.2.9 统计学分析 | 第50-51页 |
3.3 结果 | 第51-55页 |
3.3.1 平板克隆形成实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞克隆形成能力的影响 | 第51页 |
3.3.2 CCK-8 实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞增殖能力的影响 | 第51-52页 |
3.3.3 Transwell迁移实验和划痕实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞迁移能力的影响 | 第52-53页 |
3.3.4 Transwell侵袭实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞侵袭能力的影响 | 第53-54页 |
3.3.5 Western blot检测YTHDF2对Akt/ GSK3β/CyclinD1信号通路相关蛋白的影响 | 第54-55页 |
3.3.6 检测YTHDF2对侵袭相关蛋白的影响 | 第55页 |
3.4 讨论 | 第55-58页 |
第四章 YTHDF2对胰腺癌EMT的影响及分子机制 | 第58-64页 |
4.1 材料和试剂 | 第58-59页 |
4.1.1 主要材料 | 第58页 |
4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
4.1.3 主要仪器 | 第58-59页 |
4.2 方法 | 第59页 |
4.2.1 细胞复苏、培养及传代 | 第59页 |
4.2.2 Western blotting | 第59页 |
4.2.3 统计学分析 | 第59页 |
4.3 结果 | 第59-61页 |
4.3.1 下调YTHDF2对上皮间质转化(EMT)相关蛋白的影响 | 第59-60页 |
4.3.2 YTHDF2通过YAP介导了上皮间质转化 | 第60-61页 |
4.4 讨论 | 第61-64页 |
结论与展望 | 第64-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
在校期间发表论文 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-74页 |