| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 1 艾滋病(AIDs) | 第14页 |
| 2 人类免疫缺陷病毒(HIV) | 第14-15页 |
| 3 HIV几个重要的功能酶 | 第15-18页 |
| 3.1 逆转录酶(Reverse Transcriptase,RT) | 第15-17页 |
| 3.2 整合酶(Integrase,IN) | 第17-18页 |
| 3.3 蛋白酶(Protease,PR) | 第18页 |
| 4 HIV治疗药物 | 第18-19页 |
| 5 立题依据 | 第19-21页 |
| 实验材料 | 第21-24页 |
| 1 化合物与药品 | 第21页 |
| 2 细胞株 | 第21页 |
| 3 质粒 | 第21页 |
| 4 试剂 | 第21-22页 |
| 5 仪器 | 第22-24页 |
| 实验方法 | 第24-37页 |
| 1 细胞培养 | 第24页 |
| 1.1 无血清DMEM培养基的配制 | 第24页 |
| 1.2 含胎牛血清及青链霉素培养基的配制 | 第24页 |
| 1.3 10×磷酸盐(无Ca~(2+)Mg~(2+))缓冲液的配制 | 第24页 |
| 1.4 细胞培养 | 第24页 |
| 2 质粒提取 | 第24-26页 |
| 2.1 LB培养基的配制 | 第24-25页 |
| 2.2 E.coli DH5_α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3 外源DNA转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| 2.4 质粒DNA的提取 | 第26页 |
| 3 引物设计 | 第26-27页 |
| 3.1 LTR/Gag引物对 | 第26页 |
| 3.2 β-globin引物对 | 第26页 |
| 3.3 N引物对 | 第26-27页 |
| 4 VSVG/HIV-luc假病毒的制备 | 第27-28页 |
| 4.1 转染用试剂的配制 | 第27页 |
| 4.2 瞬时转染细胞制备假病毒 | 第27-28页 |
| 4.3 假病毒滴度的检测 | 第28页 |
| 5 应用假病毒药理模型筛选活性化合物及测定其IC_(50) | 第28-29页 |
| 6 应用鼠白血病病毒(MLV)考察化合物X-013103抗HIV特异性 | 第29-30页 |
| 7 应用MTT法检测化合物X-013103对293细胞存活的影响 | 第30页 |
| 8 应用PCR检测化合物X-013103对HIV-1逆转录过程的影响 | 第30-33页 |
| 8.1 加入化合物及假病毒溶液 | 第30-31页 |
| 8.2 细胞基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 8.3 PCR实验 | 第32-33页 |
| 9 应用ELISA检测化合物X-013103对HIV-1整合过程的影响 | 第33-36页 |
| 9.1 ELISA检测化合物X-013103对HIV-1整合过程的影响 | 第33-34页 |
| 9.2 pHIV-1-IN-wt质粒的构建 | 第34-36页 |
| 9.3 IN目的蛋白的表达与纯化 | 第36页 |
| 10 统计方法 | 第36-37页 |
| 实验结果 | 第37-46页 |
| 1 化合物X-013103作用靶点的确定 | 第37-41页 |
| 1.1 活性化合物的筛选 | 第37页 |
| 1.2 化合物X-013103对HIV-1野生株及耐药突变株复制的影响 | 第37-39页 |
| 1.3 化合物X-013103对MLV复制的影响 | 第39-41页 |
| 2 化合物X-013103对293细胞存活的影响 | 第41-42页 |
| 3 化合物X-013103对HIV-1逆转录过程的影响 | 第42-45页 |
| 4 化合物X-013103对HIV-1整合过程的影响 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-51页 |
| 1 假病毒技术 | 第46页 |
| 2 化合物X-013103可特异性抑制HIV-1复制 | 第46-47页 |
| 3 化合物X-013103作用机制的探讨 | 第47-49页 |
| 4 注意事项及有待改进的方面 | 第49-51页 |
| 4.1 PCR实验 | 第49-50页 |
| 4.2 ELISA实验 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
