| 引 言 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-34页 |
| 1 控制在真核生物体内特异性表达的顺式调控元件 | 第15-17页 |
| 1.1 TATA盒 | 第15页 |
| 1.2 组织特异性序列 | 第15-16页 |
| 1.3 诱导特异性序列 | 第16页 |
| 1.4 增强子和沉默子 | 第16-17页 |
| 2 在真核生物体内控制基因强势表达的顺式调控元件 | 第17-18页 |
| 2.1 CCAAT盒 | 第17页 |
| 2.2 GC盒 | 第17页 |
| 2.3 转录起始子 | 第17页 |
| 2.4 Kozak 序列 | 第17-18页 |
| 2.5 5’非翻译区的调控序列 | 第18页 |
| 3 真核生物基因侧翼未知序列克隆方法研究进展 | 第18-20页 |
| 3.1 基因组文库 | 第18-19页 |
| 3.2 接头PCR | 第19页 |
| 3.3 反向PCR | 第19-20页 |
| 4 棉花ARF1基因及其表达调控研究进展 | 第20页 |
| 5 花粉管通道法的研究进展 | 第20-34页 |
| 5.1 花粉管通道法的创立与发展 | 第22-26页 |
| 5.1.1 花粉管通道法的创立 | 第22-23页 |
| 5.1.2 花粉管通道的应用发展 | 第23-26页 |
| 5.2 花粉管通道法的机理 | 第26-27页 |
| 5.3 转基因目标性状的筛选与鉴定 | 第27-31页 |
| 5.3.1 导入目的基因的检测方法 | 第28-31页 |
| 5.3.1.1 标记基因的表达鉴定 | 第28-30页 |
| 5.3.1.2 目的基因的分子鉴定 | 第30-31页 |
| 5.4 花粉管通道导入技术的评价 | 第31-32页 |
| 5.4.1 优点 | 第31-32页 |
| 5.4.2 存在的问题 | 第32页 |
| 5.5 问题与展望 | 第32-34页 |
| 第二章 棉花腺苷酸核糖基化作用因子1 (arf1)的结构特征、替换剪接和遗传表达分析 | 第34-63页 |
| 1 材料与方法 | 第35-54页 |
| 1.1 材料 | 第35-36页 |
| 1.1.1 模板 | 第35页 |
| 1.1.2 菌种和质粒 | 第35页 |
| 1.1.3 试剂及仪器 | 第35-36页 |
| 1.2 方法 | 第36-54页 |
| 1.2.1 棉花基因组DNA提取方法 | 第36-38页 |
| 1.2.1.1 CTAB提取法 | 第36-37页 |
| 1.2.1.2 参见宋国立等的提取方法 | 第37-38页 |
| 1.2.2 棉花总RNA提取方法 | 第38-39页 |
| 1.2.3 同尾酶反向PCR染色体步移 | 第39-40页 |
| 1.2.4 快速分离目的基因cDNA 5’端未知序列和启动子技术 | 第40页 |
| 1.2.5 PCR反应 | 第40-41页 |
| 1.2.6 DNA的限制性酶切反应 | 第41-42页 |
| 1.2.7 PCR产物目的DNA片段的电泳回收 | 第42页 |
| 1.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 1.2.9 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第43-44页 |
| 1.2.10 外源片段与质粒DNA的连接反应 | 第44页 |
| 1.2.11 质粒DNA的小量提取 | 第44-45页 |
| 1.2.12 质粒DNA的大量提取 | 第45-46页 |
| 1.2.13 LB培养基 | 第46页 |
| 1.2.14 质粒DNA浓度及质量的鉴定 | 第46页 |
| 1.2.15 PCR引物 | 第46-47页 |
| 1.2.16 生物信息学分析工具 | 第47页 |
| 1.2.17 Southern blotting检测 | 第47-52页 |
| 1.2.18 Northern 印迹分析 | 第52-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-61页 |
| 2.1 棉花arf1基因转录终止位点的确定及3’端全长cDNA、DNA序列的克隆 | 第54页 |
| 2.2 棉花arf1基因上游1865 bp DNA序列的分离克隆 | 第54-55页 |
| 2.3 arf1基因上游1865 bp的DNA序列中外显子的捕获和cDNA步移引物的设计 | 第55-56页 |
| 2.4 棉花arf1全长cDNA序列的获取和替换剪接现象的发现 | 第56页 |
| 2.5 arf1基因转录起始位点的确定、启动子位置的定位 以及基因结构特征分析 | 第56-57页 |
| 2.6 棉花arf1基因的拷贝数分析 | 第57-60页 |
| 2.7 棉花arf1基因的表达分析 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 3.1 棉花arf1基因的功能研究 | 第61页 |
| 3.2 棉花arf1基因启动子的分析 | 第61页 |
| 3.3 棉花arf1基因替换剪接现象 | 第61-62页 |
| 4 小结 | 第62-63页 |
| 第三章 棉花腺苷酸核糖基化作用因子1(arf1基因)启动子的克隆分析及表达载体构建 | 第63-76页 |
| 1 田间实验地点 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-66页 |
| 2.1 材料 | 第63页 |
| 2.1.1 DNA模板 | 第63页 |
| 2.1.2 启动子 | 第63页 |
| 2.1.3 受体材料 | 第63页 |
| 2.1.4 菌种和质粒 | 第63页 |
| 2.1.5 试剂及仪器 | 第63页 |
| 2.2 方法 | 第63-66页 |
| 2.2.1 PCR引物设计 | 第63-64页 |
| 2.2.2 PCR产物纯化 | 第64页 |
| 2.2.3 pUCm-T载体自连制备 | 第64页 |
| 2.2.4 花粉管通道法导入质粒DNA方法的建立 | 第64-65页 |
| 2.2.5 转基因植株的Kan筛选 | 第65页 |
| 2.2.6 gus基因的组织化学鉴定 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-72页 |
| 3.1 启动子DNA片段的获得与连接 | 第66-67页 |
| 3.2 启动子DNA片段的验证 | 第67页 |
| 3.3 启动子DNA片段的植物表达载体构建 | 第67-70页 |
| 3.4 花粉管通道法转化棉花品系Y | 第70页 |
| 3.5 转基因棉花植株的获得 | 第70页 |
| 3.6 组织化学鉴定 | 第70-71页 |
| 3.7 PCR对gus基因的检测 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-75页 |
| 4.1 启动子片段的获得及其载体构建 | 第72-73页 |
| 4.2 关于棉花花粉管通道法的转化 | 第73页 |
| 4.3 转基因植株田间鉴定、筛选 | 第73-74页 |
| 4.4 arf1基因启动子的功能研究 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 创新点 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
