| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| ·植物开花的分子调控机理 | 第14-16页 |
| ·光周期途径 | 第14-15页 |
| ·春化途径和自主途径 | 第15页 |
| ·赤霉素途径 | 第15-16页 |
| ·植物LFY 基因研究进展 | 第16-18页 |
| ·LFY 基因结构分析 | 第16-17页 |
| ·LFY 基因的表达特性 | 第17页 |
| ·LFY 基因的功能 | 第17-18页 |
| ·植物FT 基因研究进展 | 第18页 |
| ·开花物质假说 | 第18页 |
| ·开花素的发现 | 第18页 |
| ·FT/TFL1 基因的功能 | 第18页 |
| ·MADS-BOX基因研究进展 | 第18-19页 |
| ·前景展望 | 第19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 紫花苜蓿 MsLFY 基因cDNA 序列的克隆与分析 | 第20-28页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·试剂、菌株和载体 | 第20页 |
| ·溶液的配制 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-23页 |
| ·紫花苜蓿总 RNA 的提取 | 第20页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第20-21页 |
| ·总RNA 纯度、浓度与质量鉴定 | 第21页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·MsLFY 基因cDNA 序列的 RT-PCR 扩增 | 第22页 |
| ·PCR 产物的切胶回收 | 第22页 |
| ·回收产物连接克隆载体及转化大肠杆菌感受态菌株DH5α | 第22-23页 |
| ·单克隆挑取、培养及PCR 检测 | 第23页 |
| ·测序鉴定 | 第23页 |
| ·生物信息学分析 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·紫花苜蓿总 RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·MsLFY 基因cDNA 序列的获得与序列分析 | 第24-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 紫花苜蓿 MsFT 基因cDNA 序列的克隆与分析 | 第28-35页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·试剂、菌株和载体 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·紫花苜蓿总 RNA 的提取和纯化 | 第28页 |
| ·3'-RACE Ready cDNA 的制备 | 第28-29页 |
| ·5'-RACE Ready cDNA 的制备 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·3′RACE 反应 | 第29-30页 |
| ·5′RACE 反应 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物切胶回收与连接转化 | 第31页 |
| ·测序鉴定 | 第31页 |
| ·生物信息学分析 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·目的基因3′端序列的克隆 | 第31-32页 |
| ·目的基因5′端序列的克隆 | 第32页 |
| ·目的基因cDNA 全长序列的获得 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 紫花苜蓿NMH7 基因cDNA 序列的克隆与分析 | 第35-39页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂、菌株和载体 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物切胶回收与连接转化 | 第36页 |
| ·测序鉴定 | 第36页 |
| ·生物信息学分析 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·紫花苜蓿NMH7 基因cDNA 序列的获得 | 第36页 |
| ·生物信息学分析 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 MsLFY 和MsFT 基因全长序列的克隆与分析 | 第39-44页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·试剂和菌株 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·紫花苜蓿DNA 的提取 | 第39页 |
| ·MsLFY 基因基因组序列的扩增 | 第39-40页 |
| ·MsFT 基因基因组序列的扩增 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·MsLFY 基因第一个内含子的扩增 | 第41-42页 |
| ·MsLFY 基因第二个内含子的扩增 | 第42页 |
| ·MsLFY 基因基因组全序列的获得 | 第42页 |
| ·MsFT 基因基因组全序列的获得 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第六章 MsFT 基因转录起始位点上游序列的克隆与分析 | 第44-51页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·TAIL-PCR 原理 | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·紫花苜蓿基因组DNA 提取 | 第46页 |
| ·TAIL-PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR 产物切胶回收与连接转化 | 第47页 |
| ·测序鉴定 | 第47页 |
| ·序列分析 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-49页 |
| ·第一轮扩增 | 第47-48页 |
| ·第二轮扩增 | 第48页 |
| ·第三轮扩增 | 第48页 |
| ·MsFT 基因转录起始位点上游序列的获得 | 第48-49页 |
| ·顺势作用元件预测 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第七章 MsLFY、MsFT 和NMH7 基因编码蛋白的亚细胞定位 | 第51-59页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌株、载体和试剂 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-56页 |
| ·MsLFY 基因编码蛋白的亚细胞定位 | 第51-53页 |
| ·MsFT 基因编码蛋白的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| ·NMH7 基因的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| ·制备金粉 | 第55页 |
| ·子弹制备 | 第55-56页 |
| ·重组质粒转化洋葱及检测 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-58页 |
| ·重组子MsLFY-GFP、MsFT-GFP 和NMH7-GFP 的酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·MsLFY 基因编码蛋白的亚细胞定位情况 | 第57页 |
| ·MsFT 基因编码蛋白的亚细胞定位情况 | 第57-58页 |
| ·NMH7 基因的亚细胞定位情况 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第八章 MsLFY、MsFT 和NMH7 基因的表达分析 | 第59-66页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·材料处理 | 第59页 |
| ·MsLFY 基因的表达分析 | 第59-60页 |
| ·MsFT 基因的表达分析 | 第60-61页 |
| ·NMH7 基因的表达分析 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-65页 |
| ·MsLFY 基因表达的组织差异性 | 第62-63页 |
| ·光照时间对MsLFY 基因表达的影响 | 第63页 |
| ·赤霉素处理对MsLFY 基因表达的影响 | 第63页 |
| ·MsFT 基因表达的组织差异性 | 第63-64页 |
| ·光照时间对MsFT 基因表达的影响 | 第64页 |
| ·水杨酸处理对MsFT 基因表达的影响 | 第64页 |
| ·NMH7 基因表达的组织差异性 | 第64页 |
| ·不同激素处理下NMH7 基因的表达特征 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第九章 MsLFY 基因转化烟草的研究 | 第66-73页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·菌株、载体和试剂 | 第66页 |
| ·培养基的配制 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-70页 |
| ·引物设计 | 第66-67页 |
| ·重组子pMD-MsLFY-O 的构建 | 第67页 |
| ·植物表达载体PBI-MsLFY 构建 | 第67-68页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第68页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第68-69页 |
| ·本生烟草无菌苗的培养 | 第69页 |
| ·烟草转化 | 第69页 |
| ·转基因烟草DNA 和总RNA 提取 | 第69页 |
| ·转基因烟草的PCR 鉴定 | 第69-70页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR 鉴定 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-72页 |
| ·PBI-MsLFY 的构建与酶切鉴定 | 第70-71页 |
| ·烟草再生植株的获得 | 第71页 |
| ·转基因植株的RCR 检测 | 第71页 |
| ·转基因植株的RT-RCR 检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第十章 结论与展望 | 第73-74页 |
| ·结论 | 第73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
