| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-31页 |
| 1 非洲猪瘟基本概况 | 第11-19页 |
| 1.1 病原学 | 第11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 免疫学 | 第12-15页 |
| 1.3.1 猪体免疫组织的损伤 | 第13页 |
| 1.3.2 遗传变异 | 第13页 |
| 1.3.3 抗原竞争 | 第13-14页 |
| 1.3.4 免疫抑制 | 第14页 |
| 1.3.5 免疫逃避 | 第14-15页 |
| 1.4 非洲猪瘟诊断方法研究进展 | 第15-19页 |
| 1.4.1 红血球吸附实验 | 第15-16页 |
| 1.4.2 病毒荧光抗体试验(FAT) | 第16-17页 |
| 1.4.3 分子生物学检测 | 第17-19页 |
| 1.4.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第19页 |
| 2 胶体金的性质、制备及应用 | 第19-31页 |
| 2.1 胶体金技术的基本原理 | 第20页 |
| 2.2 胶体金的特性 | 第20-21页 |
| 2.3 胶体金的制备 | 第21页 |
| 2.4 胶体金的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.5 胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存 | 第22-23页 |
| 2.6 胶体金的应用 | 第23-25页 |
| 2.6.1 胶体金在电镜水平的应用 | 第23页 |
| 2.6.2 胶体金在光镜水平的应用 | 第23页 |
| 2.6.3 凝集试验 | 第23页 |
| 2.6.4 免疫印迹技术 | 第23-24页 |
| 2.6.5 胶体金在肉眼水平的应用 | 第24页 |
| 2.6.6 胶体金在免疫层析快速诊断技术中的应用 | 第24页 |
| 2.6.7 胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用 | 第24-25页 |
| 2.7 胶体金试纸条在猪病诊断上的应用 | 第25-31页 |
| 2.7.1 胶体金试纸条在猪病毒病诊断的应用 | 第25-27页 |
| 2.7.2 胶体金试纸条在猪细菌病诊断上的应用 | 第27-28页 |
| 2.7.3 胶体金试纸条在猪寄生虫病诊断上的应用 | 第28-31页 |
| 第二章 非洲猪瘟病毒K205R基因的原核表达及其抗体制备 | 第31-48页 |
| 1 材料与仪器 | 第31-32页 |
| 1.1 试验材料 | 第31页 |
| 1.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2 试剂配制 | 第32-34页 |
| 2.1 质粒提取相关试剂 | 第32页 |
| 2.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂 | 第32-33页 |
| 2.3 表达蛋白质纯化所需要的溶液 | 第33页 |
| 2.4 酶联免疫吸附试验所需要的溶液 | 第33-34页 |
| 2.5 抗体制备所需白油佐剂 | 第34页 |
| 2.6 抗体纯化所需要的溶液 | 第34页 |
| 3 试验方法 | 第34-41页 |
| 3.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 3.2 克隆载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.1 感受态细胞的制作 | 第35页 |
| 3.2.2 质粒转化 | 第35页 |
| 3.2.3 克隆载体的鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3 表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.3.1 BL21感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 3.3.2 空载体pET32a质粒的提取 | 第37页 |
| 3.3.3 pET32a质粒双酶切 | 第37页 |
| 3.3.4 质粒载体的连接 | 第37-38页 |
| 3.3.5 质粒转化 | 第38页 |
| 3.3.6 质粒提取 | 第38页 |
| 3.3.7 菌株鉴定 | 第38-39页 |
| 3.4 菌株的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.4.1 菌株诱导表达条件的优化 | 第39-40页 |
| 3.5 目的蛋白的纯化 | 第40页 |
| 3.6 目的蛋白免疫原性分析 | 第40页 |
| 3.7 抗体的制备 | 第40-41页 |
| 4 结果 | 第41-48页 |
| 4.1 克隆载体的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2 表达载体的鉴定 | 第42-43页 |
| 4.3 菌株的诱导表达 | 第43-44页 |
| 4.4 菌株诱导表达条件的优化 | 第44-46页 |
| 4.4.1 最佳IPTG浓度的确定 | 第44-45页 |
| 4.4.2 最佳诱导时间的确定 | 第45页 |
| 4.4.3 最适培养温度的确定 | 第45-46页 |
| 4.5 目的蛋白的纯化 | 第46页 |
| 4.6 ASFV K205R表达蛋白免疫原性分析 | 第46-47页 |
| 4.7 抗ASFV K205R基因表达蛋白血清IgG的纯化 | 第47-48页 |
| 第三章 胶体金试纸条的初步研制 | 第48-62页 |
| 1 试验材料与仪器 | 第48-49页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第48页 |
| 1.2 溶液配制 | 第48-49页 |
| 1.3 制备胶体金注意事项 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 胶体金的制备 | 第49页 |
| 2.1.1 1%氯金酸溶液的制备 | 第49页 |
| 2.1.2 0.01%氯金酸溶液的制备 | 第49页 |
| 2.1.3 不同颗粒胶体金的制备 | 第49页 |
| 2.2 胶体金溶液质量的鉴定 | 第49-50页 |
| 2.3 金标蛋白的制备 | 第50-51页 |
| 2.3.1 免疫胶体金最适pH的测定 | 第50页 |
| 2.3.2 免疫胶体金最适蛋白含量的确定 | 第50页 |
| 2.3.3 金标抗体的大量标记及金标颗粒的质量鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4 金标试纸条的初步研制 | 第51-52页 |
| 2.4.1 试纸条的预处理 | 第51页 |
| 2.4.2 试纸条的组装及检测 | 第51页 |
| 2.4.3 硝酸纤维素膜划线浓度的优化 | 第51-52页 |
| 2.4.4 胶体金试纸条灵敏性研究 | 第52页 |
| 2.4.5 胶体金试纸条特异性研究 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-58页 |
| 3.1 胶体金的制备及质量鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2 金标蛋白的制备 | 第53-55页 |
| 3.2.1 免疫胶体金最适pH的测定 | 第53-54页 |
| 3.2.2 免疫胶体金最适蛋白含量的确定 | 第54页 |
| 3.2.3 金标颗粒的质量鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3 试纸条的检测 | 第55页 |
| 3.4 硝酸纤维素膜划线浓度的优化 | 第55-56页 |
| 3.4.1 T线浓度的优化 | 第55-56页 |
| 3.4.2 C线浓度的优化 | 第56页 |
| 3.5 胶体金试纸条灵敏性研究 | 第56-57页 |
| 3.6 胶体金试纸条特异性研究 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| 4.1 ASFV K205R目的基因的原核表达 | 第58页 |
| 4.2 阳性血清的制备 | 第58-59页 |
| 4.3 胶体金试纸条的制备 | 第59-60页 |
| 4.3.1 胶体金溶液的制备 | 第59页 |
| 4.3.2 金标蛋白的制备 | 第59页 |
| 4.3.3 影响试纸条灵敏性和准确性的因素 | 第59-60页 |
| 4.4 本试验的不足之处 | 第60-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
