| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1 灰葡萄孢的研究进展 | 第11-22页 |
| 1.1 灰霉病的危害及其分布 | 第11-12页 |
| 1.2 灰葡萄孢分类及其生物学特性 | 第12页 |
| 1.3 灰葡萄孢致病机理 | 第12-16页 |
| 1.3.1 草酸 | 第13-14页 |
| 1.3.2 细胞壁降解酶类 | 第14-15页 |
| 1.3.3 毒素 | 第15页 |
| 1.3.4 活性氧 | 第15-16页 |
| 1.3.5 小RNA分子 | 第16页 |
| 1.4 分生孢子萌发与产生因素 | 第16-18页 |
| 1.4.1 外界环境 | 第16-17页 |
| 1.4.2 信号转导途径 | 第17页 |
| 1.4.3 吞噬蛋白与绒毛蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5 灰葡萄孢影响菌核发育的相关因素 | 第18页 |
| 1.5.1 外界光线影响 | 第18页 |
| 1.5.2 MAPK以及cAMP路径 | 第18页 |
| 1.6 灰霉病的防治方法 | 第18-20页 |
| 1.6.1 化学防治 | 第19页 |
| 1.6.2 生物防治 | 第19页 |
| 1.6.3 农业防治 | 第19-20页 |
| 1.7 灰葡萄孢菌与核盘菌比较分析 | 第20页 |
| 1.8 线粒体载体蛋白 | 第20-21页 |
| 1.9 MFS超家族蛋白 | 第21-22页 |
| 2 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 BC1G_00904 的功能研究 | 第23-51页 |
| 1 实验材料 | 第23-25页 |
| 1.1 菌株 | 第23页 |
| 1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 1.3 载体 | 第24页 |
| 1.4 质粒提取试剂 | 第24页 |
| 1.5 其他试剂 | 第24-25页 |
| 1.6 仪器和设备 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-37页 |
| 2.1 灰葡萄孢BC1G_00904 的序列分析 | 第25-26页 |
| 2.2 灰葡萄孢BC1G_00904 的表达分析 | 第26-28页 |
| 2.2.1 RNA-seq数据库采样步骤 | 第26-27页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第27页 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测基因表达 | 第27-28页 |
| 2.3 基因的敲除与验证方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 热激转化及质粒的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 同源重组的原理 | 第29-30页 |
| 2.3.4 敲除转化片段的获得 | 第30-31页 |
| 2.3.5 融合PCR扩增转化片段 | 第31-32页 |
| 2.3.6 PEG介导的灰葡萄孢原生质体转化 | 第32-33页 |
| 2.3.7 敲除突变体的单孢纯化 | 第33页 |
| 2.3.8 敲除突变体的PCR验证 | 第33页 |
| 2.4 基因互补菌株的获得与验证 | 第33-35页 |
| 2.4.1 基因互补载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.2 农杆菌介导的灰葡萄孢转化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 BC1G_00904 互补菌株的验证 | 第35页 |
| 2.5 BC1G_00904 功能探究 | 第35-37页 |
| 2.5.1 盾壳霉寄生灰葡萄孢敲除突变体的测定 | 第35-36页 |
| 2.5.2 菌丝生长速度测定 | 第36页 |
| 2.5.3 突变体产孢量测定 | 第36页 |
| 2.5.4 突变体菌落形态观察 | 第36页 |
| 2.5.5 突变体致病力测定 | 第36-37页 |
| 2.5.6 突变体产酸能力的测定 | 第37页 |
| 2.5.7 BcMito-TTP蛋白运输物质的验证 | 第37页 |
| 2.5.8 突变体ROS和H2O2形成的测定 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-51页 |
| 3.1 灰葡萄孢BC1G_00904 序列分析 | 第37-39页 |
| 3.2 BC1G_00904 表达分析 | 第39页 |
| 3.3 BC1G_00904 敲除突变体的获得与验证 | 第39-41页 |
| 3.4 BC1G_00904 互补菌株的获得与验证 | 第41-43页 |
| 3.5 BC1G_00904 敲除与互补菌株菌落形态 | 第43-44页 |
| 3.6 盾壳霉ZS-1 对BC1G_00904 敲除与互补菌株的寄生 | 第44-45页 |
| 3.7 BC1G_00904 敲除与互补菌株菌丝的生长速度 | 第45-46页 |
| 3.8 BC1G_00904 敲除与互补菌株的分生孢子形成 | 第46-47页 |
| 3.9 BC1G_00904 敲除与互补菌株的致病力 | 第47-48页 |
| 3.10 BC1G_00904 运输物质功能探究 | 第48-49页 |
| 3.11 BC1G_00904 参与ROS和H2O2的产生 | 第49页 |
| 3.12 BC1G_00904 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 BC1G_12653、BC1G_03604 和BC1G_00245 功能的初步探究 | 第51-64页 |
| 1 实验材料 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-63页 |
| 3.1 BC1G_12653 敲除突变体的获得及基因功能初步探究 | 第51-56页 |
| 3.1.1 BC1G_12653 RNA-seq表达量分析 | 第51页 |
| 3.1.2 BC1G_12653 序列分析 | 第51-52页 |
| 3.1.3 BC1G_12653 敲除突变体获得与验证 | 第52页 |
| 3.1.4 BC1G_12653 敲除突变体菌落形态观察 | 第52-53页 |
| 3.1.5 盾壳霉ZS-1 对BC1G_12653 敲除突变体寄生作用 | 第53-54页 |
| 3.1.6 BC1G_12653 敲除突变体的菌丝生长速度 | 第54-55页 |
| 3.1.7 BC1G_12653 敲除突变体分生孢子形成 | 第55页 |
| 3.1.8 BC1G_12653 敲除突变体致病力 | 第55-56页 |
| 3.1.9 BC1G_12653 敲除突变体产酸能力 | 第56页 |
| 3.2 BC1G_03604 敲除突变体的获得及功能初步探究 | 第56-60页 |
| 3.2.1 BC1G_03604 RNA-seq表达量分析 | 第56-57页 |
| 3.2.2 BC1G_03604 序列分析 | 第57页 |
| 3.2.3 BC1G_03604 敲除突变体的获得与验证 | 第57-58页 |
| 3.2.4 盾壳霉ZS-1 对BC1G_03604 敲除突变体寄生作用 | 第58-59页 |
| 3.2.5 BC1G_03604 敲除突变体菌落形态观察 | 第59页 |
| 3.2.6 BC1G_03604 敲除突变体致病能力 | 第59-60页 |
| 3.3 BC1G_00245 敲除突变体的获得及功能初步探究 | 第60-63页 |
| 3.3.1 BC1G_00245 RNA-seq表达量分析 | 第60页 |
| 3.3.2 BC1G_00245 序列分析 | 第60-61页 |
| 3.3.3 BC1G_00245 敲除突变体的获得与验证 | 第61页 |
| 3.3.4 盾壳霉ZS-1 对BC1G_00245 敲除突变体寄生作用 | 第61-62页 |
| 3.3.5 BC1G_00245 敲除突变体菌落形态 | 第62页 |
| 3.3.6 BC1G_00245 敲除突变体菌丝生长速度 | 第62-63页 |
| 4 BC1G_12653、BC1G_03604 和BC1G_00245 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 结论与展望 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
