| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-58页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1.1 DNA甲基化 | 第13-25页 |
| 1.1.1 DNA甲基化的形成和甲基转移酶 | 第13-14页 |
| 1.1.2 DNA甲基化的分布 | 第14-15页 |
| 1.1.3 DNA甲基化结合蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.4 异常DNA甲基化和疾病的发生 | 第16-18页 |
| 1.1.5 DNA甲基化检测 | 第18-25页 |
| 1.2 DNA去甲基化 | 第25-36页 |
| 1.2.1 DNA去甲基化过程 | 第25-28页 |
| 1.2.3 5-羟甲基胞嘧啶的分布及其表观遗传学意义 | 第28-29页 |
| 1.2.4 5-羟甲基胞嘧啶的检测 | 第29-36页 |
| 1.3 N-6甲基腺嘌呤修饰 | 第36-57页 |
| 1.3.1 RNA中m6A的发现及其生物学功能 | 第36-42页 |
| 1.3.1.1 m6A的分布 | 第36-37页 |
| 1.3.1.2 m6A的"write书写"、"eraser擦除"以及"reader阅读" | 第37-40页 |
| 1.3.1.3 m6A的相关功能 | 第40-42页 |
| 1.3.2 DNA中N-6甲基腺嘌呤的发现及其生物学功能 | 第42-47页 |
| 1.3.2.1 6mA从单细胞生物到真核生物的发现 | 第42-43页 |
| 1.3.2.2 真核生物衣藻、果蝇和线虫中6mA的分布及功能研究 | 第43-46页 |
| 1.3.2.3 脊椎动物及哺乳动物胚胎干细胞中6mA的分布及功能研究 | 第46-47页 |
| 1.3.3 DNA和RNA中N-6甲基腺嘌呤的检测手段 | 第47-57页 |
| 1.3.3.1 RNA中m6A的检测方法 | 第47-55页 |
| 1.3.3.2 DNA中6mA的检测方法 | 第55-57页 |
| 1.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第二章 课题设计 | 第58-67页 |
| 2.1 Fluorescein-dGTP结合不对称PCR定性、定量检测CpG岛甲基化 | 第58-60页 |
| 2.1.1 选题依据 | 第58页 |
| 2.1.2 设计思路 | 第58-60页 |
| 2.2 基于CCP荧光共振能量转移检测DNA中的5-羟甲基胞嘧啶 | 第60-64页 |
| 2.2.1 选题依据 | 第60-61页 |
| 2.2.2 设计思路 | 第61-64页 |
| 2.3 基于Ag~+介导的引物延伸反应检测DNA中6mA修饰 | 第64-67页 |
| 2.3.1 选题依据 | 第64页 |
| 2.3.2 设计思路 | 第64-67页 |
| 第三章 Fluorescein-dGTP结合不对称PCR定性、定量检测CpG岛甲基化 | 第67-81页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 仪器及试剂 | 第68-72页 |
| 3.2.1 实验器材和设备 | 第68页 |
| 3.2.2 试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.3 DNA链 | 第69-70页 |
| 3.2.4 实验前期缓冲溶液配制及样品准备 | 第70页 |
| 3.2.5 实验条件和检测方法 | 第70-72页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第72-80页 |
| 3.3.1 不对称PCR产物验证 | 第72-73页 |
| 3.3.2 不同浓度的Fluorescein-dGTP探索 | 第73-74页 |
| 3.3.3 DNA中5-甲基胞嘧啶的定量分析 | 第74-76页 |
| 3.3.3.1 DNA内部不同5-甲基胞嘧啶个数的定量分析 | 第74-75页 |
| 3.3.3.2 混合样本中5甲基胞嘧啶的定量分析 | 第75-76页 |
| 3.3.4 不同细胞系中抑癌基因E-cadherin甲基化状态 | 第76-78页 |
| 3.3.5 DAC处理MDA-MB-231细胞后抑癌基因E-cadherin甲基化状态变化 | 第78-79页 |
| 3.3.6 荧光检测5-甲基胞嘧啶 | 第79-80页 |
| 3.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 第四章 基于CCP荧光共振能量转移检测DNA中的5-羟甲基胞嘧啶 | 第81-96页 |
| 4.1 引言 | 第81-82页 |
| 4.2 仪器及试剂 | 第82-85页 |
| 4.2.1 实验器材和设备 | 第82-83页 |
| 4.2.2 试剂 | 第83-84页 |
| 4.2.3 DNA链 | 第84页 |
| 4.2.4 实验前期缓冲溶液配制及样品准备 | 第84-85页 |
| 4.2.5 实验条件和检测方法 | 第85页 |
| 4.3 阳离子聚合物CCP合成 | 第85-87页 |
| 4.4 实验结果和讨论 | 第87-95页 |
| 4.4.1 5-醛基胞嘧啶和羟胺BODIPY反应 | 第87-90页 |
| 4.4.1.1 HPLC和MALDI-TOF质谱验证DNA-5fC和羟胺BODIPY的反应 | 第87-89页 |
| 4.4.1.2 凝胶电泳成像验证DNA-5fC和羟胺BODIPY的反应 | 第89-90页 |
| 4.4.2 阳离子聚合物CCP的荧光信号放大作用 | 第90页 |
| 4.4.3 荧光检测羟胺BODIPY标记的DNA | 第90-92页 |
| 4.4.4 绘制标准曲线图 | 第92页 |
| 4.4.5 不同细胞系中5-羟甲基胞嘧啶的含量测定 | 第92-95页 |
| 4.5 本章小结 | 第95-96页 |
| 第五章 基于Ag~+介导的引物延伸和滚环扩增反应检测DNA中6mA修饰 | 第96-120页 |
| 5.1 引言 | 第96-97页 |
| 5.2 仪器及试剂 | 第97-101页 |
| 5.2.1 实验器材和设备 | 第97页 |
| 5.2.2 试剂 | 第97-98页 |
| 5.2.3 DNA链 | 第98页 |
| 5.2.4 实验前期缓冲溶液配制及样品准备 | 第98-99页 |
| 5.2.5 实验条件和检测方法 | 第99-101页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第101-119页 |
| 5.3.1 Ag~+对Klenow exo- DNA聚合酶的影响及方法可行性 | 第101-102页 |
| 5.3.2 Klenow exo-DNA聚合酶区分A和6mA最优条件探索 | 第102-104页 |
| 5.3.2.1 最佳反应时间探索 | 第102页 |
| 5.3.2.2 最佳酶浓度探索 | 第102-103页 |
| 5.3.2.3 不同Ag~+浓度的探索 | 第103页 |
| 5.3.2.4 不同dCTP浓度对模板A/6mA-TA引物延伸的影响 | 第103-104页 |
| 5.3.3 Ag~+介导的引物延伸反应区分A和6mA的机理探究 | 第104-109页 |
| 5.3.3.1 dATP和N6mdATP被聚合酶延伸至引物与模板中胞嘧啶配对的能力比较 | 第104-106页 |
| 5.3.3.2 dCTP和N4mdCTP被聚合酶延伸至引物与模板中胞嘧啶配对的能力比较 | 第106-107页 |
| 5.3.3.3 胞嘧啶与模板中A和N1mA形成A/N1mA-Ag~+-C的差异 | 第107-108页 |
| 5.3.3.4 腺嘌呤和胞嘧啶C5位修饰碱基形成C/5mC/5hmC/5fC/5caC-Ag~+-A的差异性比较 | 第108-109页 |
| 5.3.4 Ag~+介导的引物延伸反应检测6mA的普适性和专一性研究 | 第109-112页 |
| 5.3.4.1 不同DNA序列中A和6mA的检测 | 第109-110页 |
| 5.3.4.2 DNA Taq聚合酶对于6mA的检测 | 第110-111页 |
| 5.3.4.3 不同金属离子对于6mA检测的影响 | 第111-112页 |
| 5.3.5 Ag~+介导的引物延伸反应定量分析DNA中的6mA | 第112-113页 |
| 5.3.6 双链DNA中6mA的检测 | 第113-116页 |
| 5.3.7 Ag~+介导的引物延伸结合滚环扩增反应RCA | 第116-119页 |
| 5.4 本章小结 | 第119-120页 |
| 全文总结 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-133页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 附录 | 第137-138页 |
