| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 蝎毒素的研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1 中药动物药及其研究现状 | 第12-14页 |
| 1.1.1 中药动物药 | 第12页 |
| 1.1.2 蝎及其中药入药 | 第12-13页 |
| 1.1.3 动物药研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 蝎毒素的研究现状 | 第14-20页 |
| 1.2.1 蝎与蝎毒素 | 第14页 |
| 1.2.2 蝎毒素的功能分类 | 第14-16页 |
| 1.2.3 蝎毒素的研究方法 | 第16-18页 |
| 1.2.4 蝎毒素及其应用 | 第18-20页 |
| 1.3 论文立题依据和研究内容 | 第20-22页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第20页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 东亚钳蝎转录组文库构建及分析 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 组织材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 东亚钳蝎转录组文库构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2 东亚钳蝎cDNA文库构建 | 第26-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-40页 |
| 2.3.1 东亚钳蝎转录组文库分析结果 | 第32-37页 |
| 2.3.2 东亚钳蝎cDNA文库结果 | 第37-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 东亚钳蝎蛋白组学研究 | 第42-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第42页 |
| 3.1.2 实验耗材 | 第42页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-48页 |
| 3.2.1 东亚钳蝎蛋白质组实验流程 | 第42-46页 |
| 3.2.2 东亚钳蝎蛋白质组生物信息学分析 | 第46-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-51页 |
| 3.3.1 蛋白质鉴定 | 第48页 |
| 3.3.2 Unique肽段数量分布 | 第48页 |
| 3.3.3 肽段序列覆盖率 | 第48-49页 |
| 3.3.4 GO分析 | 第49页 |
| 3.3.5 COG注释 | 第49-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 东亚钳蝎蝎毒素的分离研究 | 第52-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第52页 |
| 4.1.2 实验耗材 | 第52页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 SephadexG50分离柱的安装 | 第52-53页 |
| 4.2.2 东亚钳蝎粗毒的Sephadex G50分离与SDS-PAGE电泳鉴定 | 第53页 |
| 4.2.3 BCA发测定Sephadex G50分离组分的蛋白浓度 | 第53-54页 |
| 4.2.4 蛋白样品的冻干、复溶和定量 | 第54页 |
| 4.2.5 Sephadex G50各组分的HPLC分离 | 第54页 |
| 4.2.6 蛋白质质谱鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-58页 |
| 4.3.1 东亚钳蝎Sephadex G50分离 | 第55页 |
| 4.3.2 Sephadex G50分离的SDS-PAGE鉴定 | 第55页 |
| 4.3.3 东亚钳蝎Sephadex G50分离组分的HPLC分离 | 第55-56页 |
| 4.3.4 质谱鉴定 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 东亚钳蝎钠通道毒素BmKNaTx12的筛选鉴定和重组制备 | 第59-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 菌种与细胞 | 第59页 |
| 5.1.2 实验试剂盒、试剂与耗材 | 第59页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第59-60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-68页 |
| 5.2.1 BmKNaTx12的序列分析及同源模建 | 第60页 |
| 5.2.2 BmKNaTx12的分子动力学模拟 | 第60页 |
| 5.2.3 质粒小量制备 | 第60-61页 |
| 5.2.4 重组表达载体的构建 | 第61-66页 |
| 5.2.5 重组表达载体质粒大量制备 | 第66页 |
| 5.2.6 转染表达时间实验 | 第66-67页 |
| 5.2.7 HEK293细胞的培养与转染表达 | 第67页 |
| 5.2.8 重组BmKNaTx12的纯化 | 第67-68页 |
| 5.2.9 SDS-PAGE鉴定 | 第68页 |
| 5.2.10 HPLC鉴定 | 第68页 |
| 5.3 实验结果 | 第68-74页 |
| 5.3.0 基于转录组学和蛋白组学的蝎毒素筛选结果 | 第68页 |
| 5.3.1 BmKNaTx12的序列分析及同源模建 | 第68-69页 |
| 5.3.2 BmKNaTxl2的分子动力学模拟 | 第69-71页 |
| 5.3.3 重组表达载体的构建 | 第71-73页 |
| 5.3.4 蛋白表达量与转染时间的关系探究 | 第73页 |
| 5.3.5 重组蛋白的Pro A纯化 | 第73-74页 |
| 5.3.6 重组蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第74页 |
| 5.3.7 重组蛋白的HPLC鉴定 | 第74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 重组BmKNaTx12的钠离子通道活性研究 | 第76-80页 |
| 6.1 实验材料 | 第76页 |
| 6.1.1 实验试剂与耗材 | 第76页 |
| 6.1.2 细胞外液和电极内液的配制 | 第76页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第76页 |
| 6.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 6.2.1 细胞的复苏、培养与转染 | 第76-77页 |
| 6.2.2 细胞的传代 | 第77页 |
| 6.2.3 细胞的转染 | 第77页 |
| 6.2.4 膜片钳全细胞记录 | 第77-78页 |
| 6.3 实验结果 | 第78-79页 |
| 6.3.1 rBmKNaTx12对hNav1.7通道的作用 | 第78页 |
| 6.3.2 rBmKNaTx12对rNav1.8通道的作用 | 第78-79页 |
| 6.4 讨论 | 第79-80页 |
| 第七章 全文总结 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 附录一 术语缩略词表 | 第89-90页 |
| 附录二 数据处理和分析软件 | 第90页 |
| 附录三 网址汇总 | 第90-91页 |
| 附录四 文献综述 | 第91-98页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 硕士期间发表的学术论文及研究成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
