利用TALENs技术高效制备GGTA1基因敲除近交小型猪的研究
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 GGTA1 基因与异种器官移植 | 第13-15页 |
| 1.2 猪体细胞核移植技术 | 第15-18页 |
| 1.3 TALENS 技术与基因敲除技术 | 第18-24页 |
| 1.3.1 ZFNs | 第19-20页 |
| 1.3.2 TALENs 技术 | 第20-21页 |
| 1.3.3 CRISPR/ Cas9 技术 | 第21-24页 |
| 1.4 版纳微型猪近交系 | 第24-25页 |
| 1.5 本课题选题依据及创新性 | 第25-27页 |
| 第二章 研究内容 | 第27-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-30页 |
| 1.1 实验动物 | 第27页 |
| 1.2 细胞及菌株 | 第27页 |
| 1.3 质粒 | 第27页 |
| 1.4 试剂及溶液配制 | 第27-29页 |
| 1.5 工具酶及试剂盒 | 第29页 |
| 1.6 仪器与耗材 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-48页 |
| 2.1 PFFs 细胞系的建立及性别鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2 TALENs 构建和体外活性检测 | 第32-38页 |
| 2.3 基因敲除细胞筛选鉴定 | 第38-41页 |
| 2.4 基因敲除猪的制备 | 第41-42页 |
| 2.5 克隆猪的鉴定 | 第42-48页 |
| 2.6 脱靶分析 | 第48页 |
| 2.7 GGTA1 基因敲除公猪的制作 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-61页 |
| 3.1 PFFs 的分离培养及性别鉴定 | 第48-50页 |
| 3.2 TALENs 构建和体外活性检测 | 第50-52页 |
| 3.3 GGTA1 基因敲除细胞克隆筛选鉴定 | 第52-54页 |
| 3.4 GGTA1 KO 猪的获得 | 第54-56页 |
| 3.5 GGTA1 KO 猪表型分析 | 第56-58页 |
| 3.6 脱靶分析 | 第58-59页 |
| 3.7 GGTA1 KO 公猪的制作 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 PFFs 的建立及性别鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2 TALENs 技术 | 第62-63页 |
| 4.3 版纳微型猪近交系 | 第63-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 导师简介 | 第75-77页 |
| 作者简介 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
