| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词及中英文对照表 | 第13-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 抗体药物表达系统 | 第19-23页 |
| 1.1.1 抗体类药物表达系统概况 | 第19-20页 |
| 1.1.2 哺乳动物细胞表达系统 | 第20-21页 |
| 1.1.3 哺乳动物细胞培养 | 第21-23页 |
| 1.2 CHO细胞应用及相关研究 | 第23-30页 |
| 1.2.1 CHO细胞品系 | 第23-25页 |
| 1.2.2 表达系统介绍及CHO表达系统 | 第25-27页 |
| 1.2.3 CHO细胞表达系统相关改造 | 第27-30页 |
| 1.3 CHO筛选系统 | 第30-34页 |
| 1.3.1 筛选系统概述 | 第30-31页 |
| 1.3.2 主流筛选系统及原理 | 第31-34页 |
| 1.4 本研究的目的意义及思路 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-55页 |
| 2.1 材料 | 第36-43页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第36-38页 |
| 2.1.2 主要耗材 | 第38-39页 |
| 2.1.3 细胞株、菌株及质粒 | 第39页 |
| 2.1.4 分子克隆相关试剂与溶液 | 第39-40页 |
| 2.1.5 细胞培养及转染相关试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.6 酶联免疫及其他检测相关试剂 | 第41页 |
| 2.1.7 分子生物学溶液的配制 | 第41-42页 |
| 2.1.8 细胞生物学溶液的配制 | 第42页 |
| 2.1.9 酶联免疫实验相关溶液的配制 | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-55页 |
| 2.2.1 常规分子克隆实验方法 | 第43-45页 |
| 2.2.2 细胞生物学实验方法 | 第45-46页 |
| 2.2.3 哺乳动物细胞的转染 | 第46-47页 |
| 2.2.4 细胞产量的测定 | 第47-48页 |
| 2.2.5 细胞代谢水平分析 | 第48-50页 |
| 2.2.6 细胞内GS酶活性测定 | 第50页 |
| 2.2.7 细胞内GS拷贝数及目的蛋白拷贝数测定 | 第50-53页 |
| 2.2.8 GS结构模拟 | 第53页 |
| 2.2.9 其他数据处理及统计学分析 | 第53-55页 |
| 第三章 结果分析与讨论 | 第55-82页 |
| 3.1 细胞株构建以及筛选评价 | 第55-64页 |
| 3.1.1 细胞株构建及96well高通量筛选评价 | 第55-58页 |
| 3.1.2 细胞pool评价 | 第58-62页 |
| 3.1.3 细胞株评价 | 第62-64页 |
| 3.2 细胞对于162抗体表达水平差异的机制研究 | 第64-82页 |
| 3.2.1 细胞株的乳酸代谢和葡萄糖摄取 | 第65-68页 |
| 3.2.1.1 细胞株乳酸代谢水平分析 | 第65-67页 |
| 3.2.1.2 细胞株葡萄糖摄取分析 | 第67-68页 |
| 3.2.2 细胞株GS活性分析 | 第68-69页 |
| 3.2.3 细胞株转录水平分析 | 第69-74页 |
| 3.2.3.1 筛选标记转录水平检测分析 | 第69-71页 |
| 3.2.3.2 目的基因转录水平检测分析 | 第71-74页 |
| 3.2.4 不同种属GS结构模拟及分析 | 第74-82页 |
| 3.2.4.1 Human-GS、CHO-GS、DOG-GS结构模拟 | 第74-76页 |
| 3.2.4.2 Human-GS、CHO-GS、DOG-GS与MSX复合物的结构比对分析 | 第76-79页 |
| 3.2.4.3 GS二倍体与MSX结合能以及对应氨基酸分析 | 第79-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-84页 |
| 4.1 重组蛋白表达系统 | 第82页 |
| 4.2 CHO细胞GS筛选标记优化 | 第82页 |
| 4.3 不同GS筛选标记所体现的差异性 | 第82-84页 |
| 第五章 总结和展望 | 第84-86页 |
| 4.1 总结 | 第84页 |
| 4.2 展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 发表论文及学术成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
