| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词与英汉对照 | 第6-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 转录因子的结构特征及作用机制 | 第12-14页 |
| 1.1.1 转录因子的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 转录因子的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2 ERF转录因子研究现状 | 第14-17页 |
| 1.3 矮牵牛花香的研究现状 | 第17-22页 |
| 1.3.1 矮牵牛花香生物合成特点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 矮牵牛花香合成酶基因研究现状 | 第18-19页 |
| 1.3.3 矮牵牛花香转录因子的研究现状 | 第19-21页 |
| 1.3.4 矮牵牛花瓣中花香挥发物合成及其相关基因表达受乙烯调控 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 实验材料与用品 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂配方 | 第22-23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 矮牵牛总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.1.1 实验器具的处理与药品配制 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 提取RNA步骤 | 第24页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 基因的克隆 | 第25-27页 |
| 2.2.3.1 引物的设计 | 第25页 |
| 2.2.3.2 PCR扩增与检测 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| 2.2.4 载体的构建 | 第27-30页 |
| 2.2.4.1 目的片段与目的载体连接 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.4.3 连接产物导入大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 阳性克隆的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.4.5 质粒的抽提 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重组载体导入农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.5.1 农杆菌感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.5.2 重组质粒导入农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.6 双荧光素酶侵染体系 | 第30-32页 |
| 2.2.6.1 双荧光素酶载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.6.2 超表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.6.3 侵染和检测 | 第31-32页 |
| 2.2.7 酵母诱饵载体构建与矮牵牛cDNA文库双杂交 | 第32-36页 |
| 2.2.7.1 pGBKT7-PhERF6诱饵载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.7.2 酵母感受态制备 | 第33页 |
| 2.2.7.3 验证酵母杂交系统 | 第33页 |
| 2.2.7.4 重组诱饵载体转化酵母感受态 | 第33-34页 |
| 2.2.7.5 重组诱饵载体对酵母的毒性与自激活检测 | 第34页 |
| 2.2.7.6 诱饵与文库双杂交 | 第34-35页 |
| 2.2.7.7 营养缺陷筛选与候选菌株PCR测序 | 第35页 |
| 2.2.7.8 重新转化扩增质粒 | 第35页 |
| 2.2.7.9 共转与回转验证 | 第35-36页 |
| 2.2.7.10 酵母双杂交分析蛋白互作 | 第36页 |
| 2.2.8 材料处理与取样 | 第36-37页 |
| 2.2.8.1 节律性表达的取样 | 第36页 |
| 2.2.8.2 不同花蕾阶段的的取样 | 第36页 |
| 2.2.8.3 VIGS处理与取样 | 第36-37页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.9.1 荧光引物设计 | 第37页 |
| 2.2.9.2 荧光定量PCR方法 | 第37-38页 |
| 2.2.9.3 实验数据分析 | 第38页 |
| 2.2.10 瞬时表达与亚细胞定位分析 | 第38页 |
| 2.2.11 数据统计分析及作图 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 双荧光素酶体系载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.1.1 超表达载体的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 启动子表达载体的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 PhERF对花香基因的转录调节 | 第40-44页 |
| 3.2.1 PhERF对花香ODO1基因表达的转录调节 | 第40-41页 |
| 3.2.2 PhERF对花香EOBI基因表达的转录调节 | 第41-43页 |
| 3.2.3 PhERF对花香EOBII基因表达的转录调节 | 第43-44页 |
| 3.2.4 PhERF6对花香PAL、BPBT和PAAE基因表达的转录调节 | 第44页 |
| 3.3 酵母双杂交cDNA文库筛选PhERF6互作蛋白 | 第44-48页 |
| 3.3.1 重组质粒pGBKT7-PhERF6载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 重组载体转化酵母及自激活鉴定 | 第45页 |
| 3.3.3 pGBKT7-PhERF6诱饵载体与cDNA文库杂交及阳性克隆初步筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.4 酵母双杂交分析蛋白互作 | 第46-48页 |
| 3.4 PhERF6在不同生长阶段的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.4.1 PhERF6在花蕾不同阶段的表达分析 | 第48页 |
| 3.4.2 PhERF6在自然状态下节律性的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.5 VIGS沉默PhERF6对花香转录因子和合成酶基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.1 VIGS沉默PhERF6对花香转录因子表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.2 VIGS沉默PhERF6对花香合成酶基因表达的影响 | 第50页 |
| 3.6 VIGS沉默PhERF30对花香转录因子和合成酶基因表达的影响 | 第50-52页 |
| 3.6.1 VIGS沉默PhERF30对花香转录因子表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.6.2 VIGS沉默PhERF30对花香合成酶基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.7 PhERF30的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录A | 第67-70页 |
| 附录B | 第70页 |
