| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词和英汉对照表 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 青枯菌病害的概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 青枯菌及其危害性 | 第11页 |
| 1.1.2 青枯菌对植物的侵染过程 | 第11-12页 |
| 1.2 青枯菌病害的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 青枯菌的致病因子 | 第12-13页 |
| 1.2.2 青枯菌致病性调控机理 | 第13-15页 |
| 1.3 青枯菌中的群体感应（QS）系统 | 第15页 |
| 1.4 青枯菌基因组与致病性的关系 | 第15-16页 |
| 1.5 青枯菌致病性强弱菌株鉴定方法研究进展 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的内容、目的和意义 | 第17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料及仪器设备 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株和质粒的来源 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要试剂和其他材料 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基及溶液的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第19-20页 |
| 2.2 EP-1 Tn5插入突变体库的构建 | 第20页 |
| 2.2.1 双亲杂交 | 第20页 |
| 2.2.2 突变体的筛选 | 第20页 |
| 2.3 突变体转座子插入检验 | 第20-22页 |
| 2.3.1 青枯菌特异性检测 | 第20-21页 |
| 2.3.2 Tn5转座子插入检测 | 第21-22页 |
| 2.4 确定Tn5转座子插入位置 | 第22-28页 |
| 2.4.1 青枯菌基因组的提取 | 第22页 |
| 2.4.2 hiTAIL-PCR扩增获得目的基因序列 | 第22-25页 |
| 2.4.3 目的片段的回收 | 第25-26页 |
| 2.4.4 PCR产物的连接反应 | 第26页 |
| 2.4.5 连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α | 第26-27页 |
| 2.4.6 阳性重组转化子的鉴定 | 第27页 |
| 2.4.7 Tn5插入区侧翼序列分析 | 第27-28页 |
| 2.4.8 对目的基因进行分子生物学和生物信息学的鉴定与分析 | 第28页 |
| 2.6 表型分析及生长曲线的测定 | 第28页 |
| 2.6.1 纤维素酶检测 | 第28页 |
| 2.6.2 生物膜检测 | 第28页 |
| 2.6.3 运动性检测 | 第28页 |
| 2.6.4 生长曲线的测定 | 第28页 |
| 2.7 致病性分析 | 第28-29页 |
| 2.8 基因表达和调控分析 | 第29-32页 |
| 2.8.1 细菌RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.8.2 总RNA的纯度和完整性检测 | 第30页 |
| 2.8.3 反转录反应 | 第30-31页 |
| 2.8.4 qRT-PCR | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| 3.1 EP-1 Tn5插入突变体库的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.1 双亲杂交获得突变体 | 第32-33页 |
| 3.1.2 突变体的筛选 | 第33页 |
| 3.2 突变体插入检测 | 第33-34页 |
| 3.3 hiTAIL-PCR扩增获得目的基因序列 | 第34-40页 |
| 3.3.1 hiTAIL-PCR产物的电泳检测 | 第34页 |
| 3.3.2 阳性重组转化子的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 Tn5插入区侧翼序列分析 | 第35-37页 |
| 3.3.4 分子生物学和生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 3.4 表型分析及生长曲线的测定 | 第40-43页 |
| 3.4.1 纤维素酶检测 | 第40-41页 |
| 3.4.2 生物膜检测 | 第41页 |
| 3.4.3 运动性检测 | 第41-42页 |
| 3.4.4 生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| 3.5 致病性分析 | 第43页 |
| 3.6 基因表达和调控分析 | 第43-45页 |
| 3.6.1 细菌RNA电泳检测 | 第43-44页 |
| 3.6.2 群体感应基因表达量分析 | 第44页 |
| 3.6.3 鉴定致病力分化菌株方法的探索 | 第44-45页 |
| 4 结论与讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 结论 | 第45-46页 |
| 4.2 讨论 | 第46-49页 |
| 4.2.1 青枯菌胞外多糖突变及筛选体系的建立 | 第46-47页 |
| 4.2.2 胞外多糖及其相关基因与青枯菌致病性的关系 | 第47页 |
| 4.2.3 快速鉴定青枯菌致病力方法的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.4 有待深入研究的内容 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
