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大鼠胚胎干细胞向视网膜祖细胞分化及在动物模型中移植的研究

中文摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
1.引言第13-27页
    1.1 视网膜与视网膜变性疾病第13-19页
        1.1.1 视网膜基本结构第13-15页
        1.1.2 视网膜生理功能第15-16页
        1.1.3 视网膜变性疾病第16-17页
        1.1.4 视网膜变性疾病的治疗和面临的问题第17-19页
    1.2 干细胞移植治疗视网膜变性疾病第19-27页
        1.2.1 干细胞移植的现状第19页
        1.2.2 胚胎干细胞的研究进展和应用前景第19-20页
        1.2.3 胚胎干细胞移植面临的挑战第20-21页
        1.2.4 胚胎干细胞向视网膜细胞谱系方向分化的方法第21-25页
        1.2.5 大鼠胚胎干细胞研究的意义第25-27页
2. 材料与方法第27-51页
    2.1 实验材料第27-35页
        2.1.1 实验动物第27页
        2.1.2 哺乳动物细胞第27页
        2.1.3 细菌菌株第27页
        2.1.4 质粒第27-29页
        2.1.5 抗体第29-31页
        2.1.6 引物第31-32页
        2.1.7 细胞培养试剂第32-33页
        2.1.8 生化试剂第33-34页
        2.1.9 实验仪器第34-35页
    2.2 实验方法第35-51页
        2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞培养和处理第35-36页
        2.2.2 大鼠胚胎干细胞的复苏和培养第36-37页
        2.2.3 rESC向视网膜方向分化第37-39页
        2.2.4 活细胞工作站SFEB分化实时跟踪第39页
        2.2.5 原代SD大鼠视网膜祖细胞的分离培养第39-40页
        2.2.6 Rax::EGFP基因敲入rESC细胞系建立第40-42页
        2.2.7 质粒大量制备第42-43页
        2.2.8 慢病毒包装和浓缩第43页
        2.2.9 Brd U掺入(Incorporation)实验第43-44页
        2.2.10 RCS大鼠动物模型饲养第44页
        2.2.11 细胞移植第44-45页
        2.2.12 视觉电生理检查第45页
        2.2.13 视网膜和SFEB冰冻切片第45-46页
        2.2.14 贴壁细胞和冰冻切片免疫荧光染色第46页
        2.2.15 视网膜平铺片全组织免疫组化第46-47页
        2.2.16 SFEB全组织免疫组化第47-48页
        2.2.17 流式细胞分析第48页
        2.2.18 RT-PCR第48-49页
        2.2.19 Realtime-q PCR第49页
        2.2.20 基因芯片第49页
        2.2.21 数据统计第49-51页
3. 实验结果第51-84页
    3.1 定向诱导大鼠ES细胞向视网膜祖细胞方向分化第51-72页
        3.1.1 建立rESC向RPC定向分化的分化模型第51-54页
        3.1.2 rESC在分化过程中形成神经上皮结构第54-57页
        3.1.3 rESC分化过程中的分子表达情况第57-59页
        3.1.4 rESC分化来源的细胞表达RPC细胞标志物第59-64页
        3.1.5 rESC-RPC是处于不同早期分化阶段的细胞混合群体第64-67页
        3.1.6 rESC-RPCs和P-RPC全基因组转录本芯片分析第67-72页
    3.2 rESC-RPC移植对视网膜变性大鼠模型具有保护作用第72-84页
        3.2.1 rESC-RPCs能够保护视网膜变性大鼠的视功能第72-76页
        3.2.2 rESC-RPC移植后能够长期存活并迁移入受体视网膜第76-80页
        3.2.3 移植的rESC-RPC能分化为视网膜细胞第80-81页
        3.2.4 移植的rESC-RPC能整合到视网膜中第81-82页
        3.2.5 移植的rESC-RPC能保护视网膜结构第82-84页
4.讨论第84-94页
    4.1 大鼠ESC的神经诱导策略第84-86页
    4.2 大鼠ESC来源的神经上皮向RPC分化的策略第86-88页
    4.3 rESC-RPC全转录组基因表达芯片结果讨论第88-91页
    4.4 大鼠ESC-RPC对视网膜变性大鼠的治疗作用第91-93页
    4.5 研究大鼠ESC-RPC对视网膜变性大鼠治疗的意义第93-94页
5.结论第94-95页
参考文献第95-108页
缩写词第108-111页
致谢第111-115页
学术论文和科研成果目录第115页

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