中文摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
1.引言 | 第13-27页 |
1.1 视网膜与视网膜变性疾病 | 第13-19页 |
1.1.1 视网膜基本结构 | 第13-15页 |
1.1.2 视网膜生理功能 | 第15-16页 |
1.1.3 视网膜变性疾病 | 第16-17页 |
1.1.4 视网膜变性疾病的治疗和面临的问题 | 第17-19页 |
1.2 干细胞移植治疗视网膜变性疾病 | 第19-27页 |
1.2.1 干细胞移植的现状 | 第19页 |
1.2.2 胚胎干细胞的研究进展和应用前景 | 第19-20页 |
1.2.3 胚胎干细胞移植面临的挑战 | 第20-21页 |
1.2.4 胚胎干细胞向视网膜细胞谱系方向分化的方法 | 第21-25页 |
1.2.5 大鼠胚胎干细胞研究的意义 | 第25-27页 |
2. 材料与方法 | 第27-51页 |
2.1 实验材料 | 第27-35页 |
2.1.1 实验动物 | 第27页 |
2.1.2 哺乳动物细胞 | 第27页 |
2.1.3 细菌菌株 | 第27页 |
2.1.4 质粒 | 第27-29页 |
2.1.5 抗体 | 第29-31页 |
2.1.6 引物 | 第31-32页 |
2.1.7 细胞培养试剂 | 第32-33页 |
2.1.8 生化试剂 | 第33-34页 |
2.1.9 实验仪器 | 第34-35页 |
2.2 实验方法 | 第35-51页 |
2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞培养和处理 | 第35-36页 |
2.2.2 大鼠胚胎干细胞的复苏和培养 | 第36-37页 |
2.2.3 rESC向视网膜方向分化 | 第37-39页 |
2.2.4 活细胞工作站SFEB分化实时跟踪 | 第39页 |
2.2.5 原代SD大鼠视网膜祖细胞的分离培养 | 第39-40页 |
2.2.6 Rax::EGFP基因敲入rESC细胞系建立 | 第40-42页 |
2.2.7 质粒大量制备 | 第42-43页 |
2.2.8 慢病毒包装和浓缩 | 第43页 |
2.2.9 Brd U掺入(Incorporation)实验 | 第43-44页 |
2.2.10 RCS大鼠动物模型饲养 | 第44页 |
2.2.11 细胞移植 | 第44-45页 |
2.2.12 视觉电生理检查 | 第45页 |
2.2.13 视网膜和SFEB冰冻切片 | 第45-46页 |
2.2.14 贴壁细胞和冰冻切片免疫荧光染色 | 第46页 |
2.2.15 视网膜平铺片全组织免疫组化 | 第46-47页 |
2.2.16 SFEB全组织免疫组化 | 第47-48页 |
2.2.17 流式细胞分析 | 第48页 |
2.2.18 RT-PCR | 第48-49页 |
2.2.19 Realtime-q PCR | 第49页 |
2.2.20 基因芯片 | 第49页 |
2.2.21 数据统计 | 第49-51页 |
3. 实验结果 | 第51-84页 |
3.1 定向诱导大鼠ES细胞向视网膜祖细胞方向分化 | 第51-72页 |
3.1.1 建立rESC向RPC定向分化的分化模型 | 第51-54页 |
3.1.2 rESC在分化过程中形成神经上皮结构 | 第54-57页 |
3.1.3 rESC分化过程中的分子表达情况 | 第57-59页 |
3.1.4 rESC分化来源的细胞表达RPC细胞标志物 | 第59-64页 |
3.1.5 rESC-RPC是处于不同早期分化阶段的细胞混合群体 | 第64-67页 |
3.1.6 rESC-RPCs和P-RPC全基因组转录本芯片分析 | 第67-72页 |
3.2 rESC-RPC移植对视网膜变性大鼠模型具有保护作用 | 第72-84页 |
3.2.1 rESC-RPCs能够保护视网膜变性大鼠的视功能 | 第72-76页 |
3.2.2 rESC-RPC移植后能够长期存活并迁移入受体视网膜 | 第76-80页 |
3.2.3 移植的rESC-RPC能分化为视网膜细胞 | 第80-81页 |
3.2.4 移植的rESC-RPC能整合到视网膜中 | 第81-82页 |
3.2.5 移植的rESC-RPC能保护视网膜结构 | 第82-84页 |
4.讨论 | 第84-94页 |
4.1 大鼠ESC的神经诱导策略 | 第84-86页 |
4.2 大鼠ESC来源的神经上皮向RPC分化的策略 | 第86-88页 |
4.3 rESC-RPC全转录组基因表达芯片结果讨论 | 第88-91页 |
4.4 大鼠ESC-RPC对视网膜变性大鼠的治疗作用 | 第91-93页 |
4.5 研究大鼠ESC-RPC对视网膜变性大鼠治疗的意义 | 第93-94页 |
5.结论 | 第94-95页 |
参考文献 | 第95-108页 |
缩写词 | 第108-111页 |
致谢 | 第111-115页 |
学术论文和科研成果目录 | 第115页 |