| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 BURP蛋白家族研究现状 | 第10-13页 |
| 1.1.1 BURP蛋白家族概述及分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 BURP蛋白家族的亚细胞定位和功能 | 第11-13页 |
| 1.2 拟南芥AtRD22基因及蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 影响原核细胞进行可溶性外源蛋白表达的因素 | 第14-15页 |
| 1.3.1 融合标签对可溶性蛋白表达的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.2 诱导温度对蛋白可溶性表达的影响 | 第15页 |
| 1.4 重金属胁迫对植物的影响及植物耐受重金属胁迫的方式 | 第15-16页 |
| 1.5 蛋白与金属离子的相互作用及研究方法 | 第16-17页 |
| 1.6 研究的目的意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料和主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌种，载体和基因 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂盒、酶及化学试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 引物 | 第20-21页 |
| 2.2 主要培养基及试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.2.1 主要培养基的配制 | 第21页 |
| 2.2.2 主要缓冲液与试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.3 蛋白纯化使用试剂 | 第22页 |
| 2.2.4 固相金属离子亲和层析（IMAC）使用试剂 | 第22页 |
| 2.2.5 Western blot使用试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.6 蛋白质谱使用试剂 | 第23页 |
| 2.2.7 圆二色谱使用缓冲液 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.3.1 PCR产物纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第24页 |
| 2.3.3 切胶回收 | 第24-25页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| 2.3.5 目的基因片段与空载体的连接 | 第25-26页 |
| 2.3.6 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| 2.3.7 重组载体的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.8 重组载体构建 | 第27-29页 |
| 2.3.9 重组蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| 2.3.10 重组蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.11 蛋白纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.12 AtRD22蛋白及突变后的蛋白与金属离子的结合分析 | 第31页 |
| 2.3.13 圆二色谱分析 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-43页 |
| 3.1 AtRD22及其点突变蛋白的表达与纯化 | 第33-40页 |
| 3.1.1 AtRD22及其点突变基因表达载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 3.1.2 AtRD22蛋白及其点突变蛋白的诱导表达 | 第35-38页 |
| 3.1.3 AtRD22蛋白及其点突变蛋白的纯化 | 第38-40页 |
| 3.2 固相金属离子螯合亲和层析分析（IMAC）AtRD22蛋白及其点突变蛋白的金属离子结合分析 | 第40-42页 |
| 3.2.1 AtRD22蛋白与金属离子的固相金属螯合亲和层析 | 第40页 |
| 3.2.2 RD22(-cys)与金属离子的固相金属螯合亲和层析 | 第40-41页 |
| 3.2.3 RD22(-his)与金属离子的固相金属螯合亲和层析 | 第41-42页 |
| 3.3 AtRD22蛋白及其组氨酸突变蛋白的二级结构比较 | 第42-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 使用SUMO融合标签及降低培养温度可提高AtRD22蛋白的可溶性表达 | 第43页 |
| 4.2 AtRD22蛋白能够结合过渡金属离子 | 第43-44页 |
| 4.3 AtRD22蛋白参与植物耐受铜离子胁迫的可能机制 | 第44-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第62页 |
