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黄芩素抑制人巨细胞病毒IE86表达机制的实验研究

摘要第2-4页
Abstract第4-5页
引言第8-9页
第一章 实验材料第9-13页
    1.1 实验材料第9-11页
        1.1.1 细胞和病毒第9页
        1.1.2 实验药物第9页
        1.1.3 实验试剂第9-10页
        1.1.4 实验仪器设备第10-11页
    1.2 实验主要试剂的配制第11-13页
第二章 实验方法第13-25页
    2.1 细胞的获取与培养第13-15页
        2.1.1 人胚胎肺成纤维细胞的培养第13页
        2.1.2 人神经干细胞的培养第13-14页
        2.1.3 人星型胶质细胞的培养第14-15页
    2.2 HCMV AD169株毒种的制备与定量第15-16页
        2.2.1 HCMV AD169株毒种制备第15页
        2.2.2 病毒感染时的滴度测定(空斑定量实验法)第15-16页
    2.3 Real-time PCR实验法检测黄芩素对HCMV感染所致星形胶质细胞中IE1和IE2的mRNA水平表达变化的影响第16-18页
        2.3.1 药物处理及实验分组第16页
        2.3.2 细胞中总RNA的提取第16-17页
        2.3.3 总RNA反转录成cDNA第17页
        2.3.4 Real-time PCR反应扩增目的基因第17-18页
    2.4 染色质免疫共沉淀技术检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞IE86启动子区域组蛋白乙酰化水平的表达的影响第18-21页
        2.4.1 染色质免疫共沉淀(CHIP)技术具体实验步骤第18-20页
        2.4.2 RT-PCR分析检测CHIP结果第20-21页
    2.5 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中miR-200家族表达的影响第21-23页
        2.5.1 细胞中mi RNA的提取第21-22页
        2.5.2 miRNA反转录成cDNA第22页
        2.5.3 Real-time PCR反应扩增目的基因第22-23页
    2.6 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中HCMV的miR-UL112-1 表达的影响第23-24页
        2.6.1 细胞中mi RNA的提取第24页
        2.6.2 miRNA反转录成cDNA第24页
        2.6.3 Real-time PCR反应扩增目的基因第24页
    2.7 统计学分析第24-25页
第三章 实验结果第25-37页
    3.1 人胚胎肺成纤维细胞(HELF),人神经干细胞(NSCs)和人原代星形胶质细胞(AS)的培养第25-27页
        3.1.1 人胚胎肺成纤维细胞(HELF)的培养第25页
        3.1.2 人神经干细胞(NSCs)的培养第25-26页
        3.1.3 人原代星型胶质细胞(AS)的培养第26页
        3.1.4 人原代星型胶质细胞(AS)的鉴定第26-27页
    3.2 HCMV AD169毒株的扩增及滴度测定第27页
    3.3 黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞形态学的影响第27-28页
    3.4 Real-time PCR检测黄芩素对HCMV感染致星形胶质细胞中IE1,IE2 mRNA水平表达变化的影响第28-29页
    3.5 染色质免疫共沉淀技术检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞IE86启动子区域组蛋白乙酰化水平的表达的影响第29-32页
        3.5.1 超声破碎细胞核染色质第29-30页
        3.5.2 主要即刻早期蛋白(MIEP)的PCR结果第30-31页
        3.5.3 染色质免疫共沉淀(CHIP)检测MIEP的PCR结果第31-32页
    3.6 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中miR-200家族表达的影响第32-35页
    3.7 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中HCMV的miR-UL112-1 表达的影响第35-37页
第四章 实验讨论第37-40页
第五章 实验结论第40-41页
参考文献第41-44页
文献综述第44-55页
    综述参考文献第51-55页
致谢第55-56页

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