摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
引言 | 第8-9页 |
第一章 实验材料 | 第9-13页 |
1.1 实验材料 | 第9-11页 |
1.1.1 细胞和病毒 | 第9页 |
1.1.2 实验药物 | 第9页 |
1.1.3 实验试剂 | 第9-10页 |
1.1.4 实验仪器设备 | 第10-11页 |
1.2 实验主要试剂的配制 | 第11-13页 |
第二章 实验方法 | 第13-25页 |
2.1 细胞的获取与培养 | 第13-15页 |
2.1.1 人胚胎肺成纤维细胞的培养 | 第13页 |
2.1.2 人神经干细胞的培养 | 第13-14页 |
2.1.3 人星型胶质细胞的培养 | 第14-15页 |
2.2 HCMV AD169株毒种的制备与定量 | 第15-16页 |
2.2.1 HCMV AD169株毒种制备 | 第15页 |
2.2.2 病毒感染时的滴度测定(空斑定量实验法) | 第15-16页 |
2.3 Real-time PCR实验法检测黄芩素对HCMV感染所致星形胶质细胞中IE1和IE2的mRNA水平表达变化的影响 | 第16-18页 |
2.3.1 药物处理及实验分组 | 第16页 |
2.3.2 细胞中总RNA的提取 | 第16-17页 |
2.3.3 总RNA反转录成cDNA | 第17页 |
2.3.4 Real-time PCR反应扩增目的基因 | 第17-18页 |
2.4 染色质免疫共沉淀技术检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞IE86启动子区域组蛋白乙酰化水平的表达的影响 | 第18-21页 |
2.4.1 染色质免疫共沉淀(CHIP)技术具体实验步骤 | 第18-20页 |
2.4.2 RT-PCR分析检测CHIP结果 | 第20-21页 |
2.5 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中miR-200家族表达的影响 | 第21-23页 |
2.5.1 细胞中mi RNA的提取 | 第21-22页 |
2.5.2 miRNA反转录成cDNA | 第22页 |
2.5.3 Real-time PCR反应扩增目的基因 | 第22-23页 |
2.6 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中HCMV的miR-UL112-1 表达的影响 | 第23-24页 |
2.6.1 细胞中mi RNA的提取 | 第24页 |
2.6.2 miRNA反转录成cDNA | 第24页 |
2.6.3 Real-time PCR反应扩增目的基因 | 第24页 |
2.7 统计学分析 | 第24-25页 |
第三章 实验结果 | 第25-37页 |
3.1 人胚胎肺成纤维细胞(HELF),人神经干细胞(NSCs)和人原代星形胶质细胞(AS)的培养 | 第25-27页 |
3.1.1 人胚胎肺成纤维细胞(HELF)的培养 | 第25页 |
3.1.2 人神经干细胞(NSCs)的培养 | 第25-26页 |
3.1.3 人原代星型胶质细胞(AS)的培养 | 第26页 |
3.1.4 人原代星型胶质细胞(AS)的鉴定 | 第26-27页 |
3.2 HCMV AD169毒株的扩增及滴度测定 | 第27页 |
3.3 黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞形态学的影响 | 第27-28页 |
3.4 Real-time PCR检测黄芩素对HCMV感染致星形胶质细胞中IE1,IE2 mRNA水平表达变化的影响 | 第28-29页 |
3.5 染色质免疫共沉淀技术检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞IE86启动子区域组蛋白乙酰化水平的表达的影响 | 第29-32页 |
3.5.1 超声破碎细胞核染色质 | 第29-30页 |
3.5.2 主要即刻早期蛋白(MIEP)的PCR结果 | 第30-31页 |
3.5.3 染色质免疫共沉淀(CHIP)检测MIEP的PCR结果 | 第31-32页 |
3.6 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中miR-200家族表达的影响 | 第32-35页 |
3.7 荧光定量PCR检测黄芩素对HCMV感染的星型胶质细胞中HCMV的miR-UL112-1 表达的影响 | 第35-37页 |
第四章 实验讨论 | 第37-40页 |
第五章 实验结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-44页 |
文献综述 | 第44-55页 |
综述参考文献 | 第51-55页 |
致谢 | 第55-56页 |