| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-30页 |
| 1.1 Follistatin及其基因的结构特征 | 第14页 |
| 1.2 FST的生物学作用及其机制 | 第14-17页 |
| 1.2.1 卵泡抑素-激活素调控系统 | 第14-15页 |
| 1.2.2 卵泡抑素在动物生殖系统中的作用 | 第15页 |
| 1.2.3 卵泡抑素在生殖系统以外的生物学作用 | 第15-17页 |
| 1.2.4 FST的分泌调节 | 第17页 |
| 1.3 DNA甲基化 | 第17-23页 |
| 1.3.1 DNA甲基化的形式和机制存在差异 | 第17-18页 |
| 1.3.2 DNA全新甲基化的引发 | 第18-19页 |
| 1.3.3 DNA甲基化调控基因表达的两种假说 | 第19页 |
| 1.3.4 DNA甲基化的功能 | 第19-21页 |
| 1.3.5 影响DNA甲基化的因素 | 第21-22页 |
| 1.3.6 DNA甲基化主要的研究方法 | 第22-23页 |
| 1.4 冷诱导与细胞凋亡 | 第23-25页 |
| 1.4.1 冷诱导细胞凋亡的主要机制 | 第23-25页 |
| 1.4.2 细胞凋亡相关的基因 | 第25页 |
| 1.5 RNA干扰技术 | 第25-26页 |
| 1.5.1 RNA干扰技术的特点 | 第25-26页 |
| 1.5.2 RNA干扰技术的应用 | 第26页 |
| 1.6 测序技术的发展及应用 | 第26-28页 |
| 1.6.1 第一代测序技术 | 第26页 |
| 1.6.2 第二代测序技术 | 第26-27页 |
| 1.6.3 第三代测序技术 | 第27页 |
| 1.6.4 基因差异表达技术 | 第27页 |
| 1.6.5 数字基因表达谱 | 第27-28页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 实验材料与方法 | 第30-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 动物组织 | 第30页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第30页 |
| 2.1.3 实验试剂及耗材 | 第30页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.5 实验主要药品配制 | 第31-32页 |
| 2.1.6 主要分子生物学软件 | 第32页 |
| 2.1.7 相关生物信息学网站 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-52页 |
| 2.2.1 猪基因组DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.2 民猪总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.3 民猪FST基因启动子区、CDS区和 3’UTR克隆测序 | 第34-36页 |
| 2.2.4 FST基因CDS区克隆测序 | 第36页 |
| 2.2.5 FST基因 3’UTR区克隆测序 | 第36页 |
| 2.2.6 猪FST基因核心启动子定位 | 第36-42页 |
| 2.2.7 四种地方猪FST基因启动子核心区的甲基化状态的检测 | 第42-44页 |
| 2.2.8 FST基因在猪胎儿成纤维细胞冷诱导过程中的作用初探 | 第44-46页 |
| 2.2.9 FST基因稳定过表达和干扰成纤维细胞系的建立 | 第46-50页 |
| 2.2.10 FST基因过表达和干扰对细胞的影响 | 第50页 |
| 2.2.11 过表达和干扰细胞系的数字基因表达谱测序 | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-91页 |
| 3.1 民猪FST基因启动子区、CDS区和 3’UTR的克隆测序结果 | 第52-62页 |
| 3.1.1 猪基因组DNA提取 | 第52页 |
| 3.1.2 民猪总RNA提取 | 第52-53页 |
| 3.1.3 民猪FST基因启动子区扩增结果 | 第53-55页 |
| 3.1.4 民猪FST基因CDS区扩增结果 | 第55-56页 |
| 3.1.5 民猪FST基因 3’UTR的扩增结果 | 第56-58页 |
| 3.1.6 民猪FST基因核心启动子的定位 | 第58-62页 |
| 3.2 四种地方猪FST基因启动子核心区的甲基化状态比较 | 第62-63页 |
| 3.3 冷诱导对猪成纤维细胞的影响及FST基因的功能 | 第63-71页 |
| 3.3.1 4℃冷诱导对猪成纤维细胞凋亡的影响 | 第63-69页 |
| 3.3.2 4 ℃冷诱导FST基因甲基化变化情况 | 第69-70页 |
| 3.3.3 冷诱导过程中相关基因的表达变化 | 第70-71页 |
| 3.4 FST基因稳定过表达和干扰成纤维细胞系的建立 | 第71-74页 |
| 3.4.1 重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-FST的构建 | 第71页 |
| 3.4.2 稳定过表达FST基因的成纤维细胞的转染和筛选 | 第71-72页 |
| 3.4.3 重组干扰质粒的构建 | 第72-73页 |
| 3.4.5 稳定干扰FST基因的成纤维细胞的转染和筛选 | 第73-74页 |
| 3.5 FST基因过表达和干扰对细胞的影响 | 第74-78页 |
| 3.5.1 FST基因对猪成纤维细胞增殖的影响 | 第74页 |
| 3.5.2 稳定过表达和干扰FST基因对成纤维细胞冷诱导的影响 | 第74-76页 |
| 3.5.3 细胞形态观察 | 第76页 |
| 3.5.4 各实验组凋亡相关基因的mRNA表达量 | 第76-78页 |
| 3.5.5 FST基因对Bcl-2 和Bax比例关系的影响 | 第78页 |
| 3.6 数字基因表达谱结果分析 | 第78-91页 |
| 3.6.1 RNA的质量检测 | 第78-79页 |
| 3.6.2 测序质量评估 | 第79-81页 |
| 3.6.3 基因表达定量 | 第81-91页 |
| 4 讨论 | 第91-95页 |
| 4.1 民猪FST基因的基本信息 | 第91页 |
| 4.2 民猪FST基因核心启动子的定位 | 第91页 |
| 4.3 FST基因与细胞增殖 | 第91-92页 |
| 4.4 冷诱导与DNA甲基化 | 第92页 |
| 4.5 冷诱导与猪成纤维细胞凋亡 | 第92-93页 |
| 4.6 冷诱导与相关基因表达的变化 | 第93页 |
| 4.7 FST基因与成纤维细胞冷诱导 | 第93-94页 |
| 4.8 FST基因发挥作用的通路 | 第94-95页 |
| 5 结论 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第107页 |
