| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-31页 |
| 1 海洋石油烃的污染现状 | 第16-18页 |
| 1.1 海洋石油的危害及其成因 | 第16-17页 |
| 1.2 石油进入海洋后的行为及归宿 | 第17页 |
| 1.3 海洋中石油的污染治理 | 第17-18页 |
| 2 海洋石油烃降解微生物的研究现状 | 第18-23页 |
| 2.1 海洋石油烃降解微生物的种类概况 | 第18-19页 |
| 2.2 食烷菌属（Alcanivorax）研究概况 | 第19页 |
| 2.3 本实验室对石油烃降解细菌Alcanivorax dieselolei B5降解通路研究 | 第19-22页 |
| 2.4 微生物内膜转运系统研究概况 | 第22-23页 |
| 3 TRAP转运系统研究概况 | 第23-27页 |
| 4 依赖表面等离子（SPR）的Biacore技术介绍 | 第27-29页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第29-31页 |
| 第二章 食烷菌Alcanivorax dieselolei B5的烷烃内膜转运系统的研究 | 第31-53页 |
| 1 材料与方法 | 第31-46页 |
| 1.1 食烷菌Alcanivorax dieselolei B5的基本信息 | 第31页 |
| 1.2 材料 | 第31-35页 |
| 1.2.1 培养基 | 第31页 |
| 1.2.2 主要溶液 | 第31-33页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.2.4 主要仪器 | 第34-35页 |
| 1.2.5 主要引物 | 第35页 |
| 1.2.6 分析软件及网站 | 第35页 |
| 1.3 实验方法 | 第35-46页 |
| 1.3.1 细菌单菌基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 1.3.2 高保真扩增底物连接蛋白Dct P基因的PCR反应 | 第36-37页 |
| 1.3.3 PCR产物纯化 | 第37-38页 |
| 1.3.4 底物连接蛋白基因Dct P与pet-28a质粒的双酶切体系 | 第38页 |
| 1.3.5 DNA片段的检测 | 第38页 |
| 1.3.6 琼脂糖凝胶上回收双酶切DNA片段 | 第38-39页 |
| 1.3.7 底物连接蛋白Dct P基因与蛋白表达质粒pet-28a的融合构建 | 第39页 |
| 1.3.8 大肠杆菌DH5a和BL21菌株感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 1.3.9 连接后的质粒转化入大肠杆菌DH5a | 第40页 |
| 1.3.10 阳性质粒转化产物的PCR验证 | 第40-41页 |
| 1.3.11 质粒提取 | 第41-42页 |
| 1.3.12 底物连接蛋白Dct P基因表达载体转化入BL21 | 第42页 |
| 1.3.13 目的蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| 1.3.14 破碎细胞 | 第42页 |
| 1.3.15 SDS-PAGE胶的制作 | 第42-43页 |
| 1.3.16 SDS-PAGE初步探究蛋白的表达 | 第43页 |
| 1.3.17 Ni-NTA镍柱纯化目的蛋白 | 第43-44页 |
| 1.3.18 NIC疏水柱纯化目的蛋白 | 第44页 |
| 1.3.19 SDS-PAGE检测纯化结果 | 第44页 |
| 1.3.20 蛋白透析与保存 | 第44-45页 |
| 1.3.21 超滤管去除透析液 | 第45页 |
| 1.3.22 表面等离子共振法检验蛋白质功能 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| 2.1 底物连接蛋白Dct P基因与质粒pet-28a连接结果 | 第46-47页 |
| 2.2 SDS-PAGE检测最终纯化结果 | 第47-49页 |
| 2.3 底物连接蛋白Dct P的立体结构预测 | 第49-50页 |
| 2.4 底物连接蛋白与烷烃结合实验 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 第三章 一株石油降解菌的筛选及其降解特性的分析 | 第53-74页 |
| 1 材料与方法 | 第53-63页 |
| 1.1 菌株来源 | 第53页 |
| 1.2 材料 | 第53-56页 |
| 1.2.1 培养基 | 第53页 |
| 1.2.2 主要溶液 | 第53页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第53-55页 |
| 1.2.4 主要仪器 | 第55页 |
| 1.2.5 引物 | 第55页 |
| 1.2.6 分析软件和网站 | 第55-56页 |
| 1.3 实验方法 | 第56-63页 |
| 1.3.1 样品的采集 | 第56页 |
| 1.3.2 石油降解微生物的富集、分离和鉴定 | 第56-57页 |
| 1.3.3 新种的烷烃降解范围的初步测定 | 第57页 |
| 1.3.4 16SrDNA基因序列分析 | 第57-59页 |
| 1.3.5 形态学特征 | 第59页 |
| 1.3.6 生理生化特征 | 第59-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-72页 |
| 2.1 石油降解微生物的富集、分离和鉴定 | 第63页 |
| 2.2 烷烃降解范围的测定 | 第63-65页 |
| 2.3 16Sr DNA序列比较分析 | 第65-66页 |
| 2.4 新菌的表型分析 | 第66-67页 |
| 2.5 新菌的生理生化特性分析 | 第67-69页 |
| 2.6 脂肪酸组成分析 | 第69-70页 |
| 2.7 新种的描述 | 第70-71页 |
| 2.8 基因组概况 | 第71页 |
| 2.9 基因组中与烷烃降解相关的基因的初步分析 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 小结与展望 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
