摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
前言 | 第8-10页 |
第1章 筛选BIVM是microRNA-192 和-215 在胃细胞的靶基因 | 第10-14页 |
1.1 实验材料与方法 | 第10-12页 |
1.1.1 细胞培养 | 第10-11页 |
1.1.2 细胞转染 | 第11页 |
1.1.2.1 试剂和材料 | 第11页 |
1.1.2.2 实验步骤 | 第11页 |
1.1.3 基因表达谱芯片测试 | 第11-12页 |
1.1.4 microRNA靶基因预测引擎 | 第12页 |
1.1.4.1 搜索miR靶基因预测引擎 | 第12页 |
1.1.4.2 软件预测方法 | 第12页 |
1.2 实验结果 | 第12-13页 |
1.2.1 基因表达谱芯片 | 第12-13页 |
1.2.2 靶基因预测引擎显示BIVM是microRNA-192 和-215 潜在的靶基因 | 第13页 |
1.3 结论 | 第13-14页 |
第2章 确认BIVM是microRNA-192 和-215 在胃细胞中的靶基因 | 第14-35页 |
2.1 实验材料与方法 | 第14-28页 |
2.1.1 实时荧光定量PCR | 第14-17页 |
2.1.1.1 试剂和材料 | 第14页 |
2.1.1.2 实验步骤 | 第14-17页 |
2.1.2 Western Blotting | 第17-20页 |
2.1.2.1 试剂和材料 | 第17-18页 |
2.1.2.2 实验步骤 | 第18-20页 |
2.1.3 荧光素酶报告系统检测BIVM与miR-192 和mi R-215 的相互作用 | 第20-28页 |
2.1.3.1 试剂和材料 | 第20-21页 |
2.1.3.2 方法 | 第21-28页 |
2.2 实验结果 | 第28-34页 |
2.2.1 实时荧光定量PCR确认micRNA-192 和-215 调控BIVM的m RNA | 第28-29页 |
2.2.2 Western Blotting确认micRNA-192 和-215 调控BIVM蛋白 | 第29-30页 |
2.2.3 荧光素酶报告系统检测确认BIVM是micRNA-192 和-215 的靶基因 | 第30-34页 |
2.2.3.1 BIVM基因的 3’UTR区载体的构建 | 第30-31页 |
2.2.3.2 BIVM 3'UTR mut质粒的测序与比对结果 | 第31-33页 |
2.2.3.3 荧光素酶报告系统检测miR-192 和-215 与BIVM的 3'UTR区的结合情况 | 第33-34页 |
2.3 结论 | 第34-35页 |
第3章 BIVM参与调控的胃细胞生物学功能 | 第35-44页 |
3.1 实验材料和方法 | 第35-38页 |
3.1.1 肿瘤细胞划痕愈合实验 | 第35页 |
3.1.1.1 实验细胞 | 第35页 |
3.1.1.2 实验试剂与仪器 | 第35页 |
3.1.1.3 实验方法 | 第35页 |
3.1.2 cck-8 细胞增殖实验 | 第35-36页 |
3.1.2.1 实验细胞 | 第35-36页 |
3.1.2.2 实验试剂与仪器 | 第36页 |
3.1.2.3 实验方法 | 第36页 |
3.1.3 采用流式细胞术(PI染色法)检测细胞周期 | 第36-37页 |
3.1.3.1 实验细胞 | 第36页 |
3.1.3.2 实验试剂与仪器 | 第36-37页 |
3.1.3.3 实验方法 | 第37页 |
3.1.4 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡的检测 | 第37-38页 |
3.1.4.1 实验细胞 | 第37页 |
3.1.4.2 实验试剂与仪器 | 第37页 |
3.1.4.3 实验方法 | 第37-38页 |
3.2 实验结果 | 第38-43页 |
3.2.1 BIVM抑制细胞的迁移能力 | 第38-39页 |
3.2.2 cck-8 细胞增殖实验 | 第39-40页 |
3.2.3 采用流式细胞术(PI染色法)检测细胞周期 | 第40-41页 |
3.2.4 BIVM抑制细胞凋亡 | 第41-43页 |
3.3 结论 | 第43-44页 |
第4章 BIVM基因对胃癌细胞体内生物学特性的影响 | 第44-46页 |
4.1 实验材料和方法 | 第44页 |
4.1.1 裸鼠皮下成瘤实验 | 第44页 |
4.1.1.1 实验细胞 | 第44页 |
4.1.1.2 实验试剂与仪器 | 第44页 |
4.1.1.3 方法 | 第44页 |
4.2 实验结果 | 第44-45页 |
4.3 结论 | 第45-46页 |
第5章 讨论 | 第46-48页 |
参考文献 | 第48-51页 |
致谢 | 第51-52页 |
附录:英语缩略词表 | 第52-54页 |
攻读硕士学位期间的研究成果 | 第54页 |