| 致谢 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第14-37页 |
| 1.1 细胞色素c成熟系统 | 第14-16页 |
| 1.1.1 细胞色素 | 第14页 |
| 1.1.2 c型细胞色素的成熟 | 第14-16页 |
| 1.2 亚硝酸盐在细菌中的代谢过程 | 第16-23页 |
| 1.2.1 生物体内亚硝酸盐的氧化与还原 | 第17-19页 |
| 1.2.2 S.oneidensis硝酸盐与亚硝酸盐还原系统 | 第19-20页 |
| 1.2.3 硝酸盐及亚硝酸盐还原系统的调控 | 第20-23页 |
| 1.3 亚硝酸盐对细胞的毒性机理 | 第23-25页 |
| 1.4 S.oneidensis的厌氧呼吸系统 | 第25-30页 |
| 1.4.1 周质空间电子传递网络 | 第26-28页 |
| 1.4.2 胞外电子传递途径 | 第28-30页 |
| 1.5 S.oneidensis中的全局调控蛋白 | 第30-33页 |
| 1.6 本研究的背景、主要内容和意义 | 第33-37页 |
| 2 S.oneidensis细胞色素c成熟系统的组成及其功能特征 | 第37-52页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第38页 |
| 2.1.2 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第38-40页 |
| 2.1.3 利用新型BP重组技术质粒构建框内(in-frame)缺失突变株 | 第40页 |
| 2.1.4 框内缺失突变株的回补 | 第40-41页 |
| 2.1.5 突变株的生理特征 | 第41-42页 |
| 2.1.6 生化方法 | 第42页 |
| 2.1.7 统计分析 | 第42页 |
| 2.2 结果与分析 | 第42-49页 |
| 2.2.1 c型细胞色素基因在转录水平的活跃度 | 第42-44页 |
| 2.2.2 构建基于att原理的突变技术及一整套S.oneidensis细胞色素c单敲突变株的获得 | 第44-45页 |
| 2.2.3 生物信息学分析(In silico analysis)S.oneidensis中的Ccm系统 | 第45-47页 |
| 2.2.4 细胞色素c的成熟不需要ccmF_2-nrfF-SO0476 | 第47-49页 |
| 2.2.5 细胞色素c的成熟需要SO0265和CcmH但不需要SO0269 | 第49页 |
| 2.3 讨论 | 第49-52页 |
| 3 亚硝酸盐通过降低胞内cAMP水平来抑制S.oneidensis延胡索酸的呼吸 | 第52-73页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-57页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第53-55页 |
| 3.1.2 cymA,fccA,nrfA,和scyA基因的控制性表达 | 第55页 |
| 3.1.3 化学分析 | 第55页 |
| 3.1.4 启动子活性检测 | 第55-56页 |
| 3.1.5 GFP融合表达及荧光定量 | 第56页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE,heme-染色,免疫印迹分析 | 第56-57页 |
| 3.1.7 亚硝酸盐敏感性分析 | 第57页 |
| 3.1.8 其他分析 | 第57页 |
| 3.2 结果与分析 | 第57-69页 |
| 3.2.1 无氧环境下亚硝酸盐对S.oneidensis生长的抑制效应 | 第57-59页 |
| 3.2.2 亚硝酸并不是通过产生NO来抑制延胡索酸的呼吸 | 第59-60页 |
| 3.2.3 亚硝酸盐未直接抑制CymA或延胡索酸还原酶 | 第60-63页 |
| 3.2.4 亚硝酸盐改变了细胞色素c的合成水平 | 第63-65页 |
| 3.2.5 亚硝酸盐导致的细胞色素c减少可能是由于Crp-cAMP活性降低 | 第65-67页 |
| 3.2.6 亚硝酸盐存在下nap和nrf操纵子的差异性表达 | 第67-68页 |
| 3.2.7 亚硝酸盐对cAMP产量的影响不依赖于NarP-NarQ二元系统 | 第68-69页 |
| 3.3 讨论 | 第69-73页 |
| 4 NapB在亚硝酸盐抑制S.oneidensis延胡索酸呼吸过程中发挥的作用 | 第73-92页 |
| 4.1 材料与方法 | 第75-78页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第75页 |
| 4.1.2 框内缺失突变株构建及回补 | 第75-77页 |
| 4.1.3 转座子插入突变(Transposon mutagenesis) | 第77页 |
| 4.1.4 随机引物PCR(AP-PCR) | 第77页 |
| 4.1.5 化学分析 | 第77-78页 |
| 4.1.6 启动子活性分析 | 第78页 |
| 4.1.7 SDS-PAGE、heme染色和免疫印迹分析(Western blot) | 第78页 |
| 4.1.8 Nadi分析 | 第78页 |
| 4.1.9 其他分析 | 第78页 |
| 4.2 结果与分析 | 第78-88页 |
| 4.2.1 napB基因缺失可以提高S.oneidensis对亚硝酸盐的耐受性 | 第78-79页 |
| 4.2.2 亚硝酸盐无论在有氧或无氧环境下均可诱导出大量NapB | 第79-81页 |
| 4.2.3 NapB间接抑制nrfA基因的表达 | 第81-83页 |
| 4.2.4 过量的NapB本身即可抑制细菌的生长 | 第83-85页 |
| 4.2.5 NapB可能将电子传递给三价铁还原酶 | 第85-88页 |
| 4.3 讨论 | 第88-92页 |
| 5 论文总结 | 第92-96页 |
| 5.1 主要研究成果 | 第92-93页 |
| 5.2 创新之处 | 第93-94页 |
| 5.3 不足与展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 附录 | 第114-121页 |
| 作者简介及攻读期成果 | 第121页 |
