摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
1 前言 | 第12-21页 |
1.1 三-(β-氯乙基)磷酸酯(Tris(2-chloroethyl)phosphate,TCEP)介绍 | 第12-13页 |
1.2 TCEP与过氧化损伤 | 第13-14页 |
1.3 线粒体 | 第14-16页 |
1.3.1 线粒体结构与功能 | 第14-15页 |
1.3.2 线粒体与过氧化损伤 | 第15-16页 |
1.4 细胞凋亡 | 第16-18页 |
1.5 自噬 | 第18-19页 |
1.6 组蛋白去乙酰化酶6 | 第19-20页 |
1.7 本研究的意义 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-30页 |
2.1 主要实验试剂和抗体 | 第21-22页 |
2.1.1 抗体 | 第21-22页 |
2.2 主要仪器 | 第22页 |
2.3 细胞来源及培养 | 第22-23页 |
2.4 细胞实验处理 | 第23页 |
2.5 CCK-8检测细胞活性 | 第23页 |
2.6 收集样品 | 第23-24页 |
2.7 免疫印迹 | 第24-26页 |
2.7.1 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第24-25页 |
2.7.2 转膜 | 第25页 |
2.7.3 显色 | 第25-26页 |
2.8 HDAC6活性检测 | 第26页 |
2.9 JC-1线粒体膜电位检测 | 第26-27页 |
2.10 线粒体提取 | 第27-29页 |
2.10.1 DCF法测ROS含量 | 第27页 |
2.10.2 线粒体Ca~(2+)-ATPase活性检测 | 第27-28页 |
2.10.3 细胞色素C氧化酶活性检测 | 第28-29页 |
2.11 免疫荧光 | 第29页 |
2.12 统计学分析 | 第29-30页 |
3 结果 | 第30-38页 |
3.1 TCEP处理导致N2a细胞活性下降 | 第30页 |
3.2 TCEP处理诱导N2a细胞的过氧化损伤 | 第30-31页 |
3.3 VitE的抗氧化保护作用 | 第31-32页 |
3.4 线粒体ROS水平的检测以及VitE的阻止作用 | 第32-33页 |
3.5 TCEP处理导致N2a细胞线粒体膜电位下降 | 第33页 |
3.6 TCEP处理导致N2a细胞线粒体Ca~(2+)-APase以及Cyt C氧化酶活性下降 | 第33-34页 |
3.7 TCEP处理对Bcl-2,Caspase-9和Caspase-3的影响 | 第34-35页 |
3.8 TCEP处理导致HDAC6活性降低 | 第35-36页 |
3.9 TCEP处理对N2a细胞骨架的影响 | 第36-38页 |
4 讨论 | 第38-43页 |
4.1 TCEP诱导N2a细胞过氧化损伤 | 第38-39页 |
4.2 TCEP诱导N2a细胞线粒体过氧化损伤 | 第39-40页 |
4.3 TCEP对细胞凋亡的影响 | 第40-41页 |
4.4 TCEP诱导处理对HDAC6活性和细胞微管网状结构的影响 | 第41-43页 |
5 结论 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-54页 |
附录 | 第54-55页 |
致谢 | 第55页 |