| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1. 莱茵衣藻表达体系 | 第13-16页 |
| 1.1.1. 莱茵衣藻表达体系的特征 | 第14页 |
| 1.1.2. 莱茵衣藻的生活史 | 第14-15页 |
| 1.1.3. 莱茵衣藻的品系 | 第15-16页 |
| 1.2. 莱茵衣藻细胞的转化方法 | 第16-17页 |
| 1.2.1. 玻璃珠转化法 | 第16页 |
| 1.2.2. 电击转化法 | 第16-17页 |
| 1.2.3. 基因枪法 | 第17页 |
| 1.3. Zeocin-Sh ble基因筛选系统 | 第17-18页 |
| 1.4. 转座子以及转座酶 | 第18-19页 |
| 1.5. 藻类基因工程展望 | 第19-20页 |
| 1.6. 本课题的研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第2章 piggyBac转座子基因的克隆以及转化 | 第21-39页 |
| 2.1. 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1. 藻种和培养液 | 第21-23页 |
| 2.1.2. 质粒和菌种 | 第23-24页 |
| 2.1.3. 试剂及试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.4. 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.5. 实验耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.6. 常用缓冲液和试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.2. 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1. 莱茵衣藻的培养 | 第26-27页 |
| 2.2.2. 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.2.3. pXL-Bac Ⅱ-Ble质粒构建 | 第27-30页 |
| 2.2.3.1. pSP124S质粒和pXL-Bac Ⅱ质粒的双酶切 | 第29页 |
| 2.2.3.2. Ble基因片段的胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3. NANO-200检测回收的BLE基因浓度 | 第30页 |
| 2.2.3.4. 将Ble基因与pXL-BacⅡ载体连接 | 第30页 |
| 2.2.4. pXL-Bacll-Ble质粒扩增 | 第30-32页 |
| 2.2.5. 提取重组质粒pXL-Bacll-Ble | 第32-33页 |
| 2.2.6. 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第33页 |
| 2.2.7. pXL-Bacll-Ble质粒单酶切 | 第33页 |
| 2.2.8. pXL-Bacll-Ble质粒的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.9. Colony PCR Assay | 第34-35页 |
| 2.3. 结果分析 | 第35-37页 |
| 2.3.1. pXL-BacⅡ质粒和pSP124S质粒的双酶切结果 | 第35页 |
| 2.3.2. 重组质粒pXL-Bac-Ble的鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.3.3. 重组质粒pXL-Bac-Ble的单酶切结果 | 第36页 |
| 2.3.4. pXL-Bacll-Ble质粒的转化结果 | 第36-37页 |
| 2.3.5. colony PCR结果分析 | 第37页 |
| 2.4. 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5. 小结 | 第38-39页 |
| 第3章 piggyBac转座酶基因的克隆以及转化 | 第39-53页 |
| 3.1. 材料和方法 | 第39-42页 |
| 3.1.1. 藻种和培养液 | 第39页 |
| 3.1.2. 质粒和菌种 | 第39-40页 |
| 3.1.3. 试剂及试剂盒 | 第40页 |
| 3.1.4. 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.1.5. 实验耗材 | 第41页 |
| 3.1.6. 常用缓冲液和试剂的配制 | 第41-42页 |
| 3.2. 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1. 引物设计 | 第42页 |
| 3.2.2. 密码子优化后的转座酶与原有序列GC含量对比 | 第42-43页 |
| 3.2.3. TPase基因ORF序列的扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.4. Tpase基因克隆到TOPO载体上 | 第44页 |
| 3.2.5. 重组质粒的转化 | 第44页 |
| 3.2.6. 重组质粒提取 | 第44-45页 |
| 3.2.7. 重组质粒测序分析 | 第45页 |
| 3.2.8. TPase ORF克隆到pJR38载体上 | 第45页 |
| 3.2.9. pJR38-crTPase的构建 | 第45页 |
| 3.2.10. pJR38-TPase与pJR38-crTPase重组质粒的电转 | 第45-46页 |
| 3.2.11. 转化子的扩大培养 | 第46页 |
| 3.2.12. Tris-酚氯仿-异戊醇法提取基因组DNA | 第46-47页 |
| 3.2.13. RFLP分析 | 第47页 |
| 3.3. 结果分析 | 第47-52页 |
| 3.3.1. pBS-IFP2-ORF PCR结果 | 第47-48页 |
| 3.3.2. TOPO重组质粒的双酶切结果 | 第48页 |
| 3.3.3. pJR38-TPase的双酶切 | 第48-49页 |
| 3.3.4. Puc_Cr_TPase的双酶切 | 第49页 |
| 3.3.5. pJR38-crTPase的双酶切 | 第49-50页 |
| 3.3.6. pJR38-TPase和pJR38-crTPase单酶切结果 | 第50页 |
| 3.3.7. RFLP分析结果 | 第50-52页 |
| 3.4. 小结 | 第52-53页 |
| 第4章 PB转座元件非常规性剪切的验证 | 第53-58页 |
| 4.1. 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1. 藻种和培养液 | 第53页 |
| 4.1.2. 试剂 | 第53页 |
| 4.1.3. 容器 | 第53页 |
| 4.1.4. 突变子的筛选 | 第53-54页 |
| 4.2. 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1. Flanking PCR Assay原理 | 第54页 |
| 4.2.2. Flanking PCR Assay | 第54-55页 |
| 4.3. 基因序列比对 | 第55-56页 |
| 4.4. Flanking PCR结果与分析 | 第56-57页 |
| 4.5. 小结 | 第57-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
