| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 多亚基酶简介 | 第7-8页 |
| 1.1.1 多亚基酶的结构特征 | 第7页 |
| 1.1.2 多亚基酶的稳定性 | 第7-8页 |
| 1.1.3 多亚基酶失活的一般过程 | 第8页 |
| 1.2 改善多亚基酶稳定性的技术 | 第8-11页 |
| 1.2.1 优化微环境 | 第9页 |
| 1.2.2 蛋白质水平改造 | 第9-10页 |
| 1.2.3 核酸水平改造 | 第10-11页 |
| 1.3 肌酸酶研究进展简介 | 第11-14页 |
| 1.3.1 肌酸酶的概述及应用 | 第11-12页 |
| 1.3.2 同源二聚体肌酸酶的结构 | 第12-13页 |
| 1.3.3 肌酸酶的稳定性研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基及常用溶液配制 | 第16页 |
| 2.2 P. putida肌酸酶序列优化表达的实验方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 肌酸酶基因序列优化 | 第16页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化 | 第18页 |
| 2.2.4 重组质粒的鉴定 | 第18页 |
| 2.3 重组肌酸酶表达及酶学性质实验方法 | 第18-20页 |
| 2.3.1 粗酶液制备 | 第18-19页 |
| 2.3.2 纯酶制备 | 第19页 |
| 2.3.3 酶学性质研究 | 第19-20页 |
| 2.4 肌酸酶多聚赖氨酸表面化学修饰的实验方法 | 第20-21页 |
| 2.4.1 肌酸酶分子表面氨基酸分析 | 第20页 |
| 2.4.2 修饰条件优化 | 第20页 |
| 2.4.3 修饰结果鉴定 | 第20页 |
| 2.4.4 修饰后肌酸酶的酶学性质研究 | 第20-21页 |
| 2.5 构建肌酸酶亚基间二硫键的实验方法 | 第21-23页 |
| 2.5.1 引入亚基间二硫键位点的选择依据 | 第21页 |
| 2.5.2 突变体的构建及表达 | 第21-22页 |
| 2.5.3 突变前后酶学性质研究 | 第22页 |
| 2.5.4 突变酶的结构分析 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-45页 |
| 3.1 P. putida肌酸酶序列优化表达及酶学性质研究 | 第23-31页 |
| 3.1.1 肌酸酶基因序列的优化设计 | 第23-26页 |
| 3.1.2 合成肌酸酶基因序列在E. coli中表达验证 | 第26-29页 |
| 3.1.3 重组肌酸酶的酶学性质研究 | 第29-31页 |
| 3.2 多聚赖氨酸修饰双亚基肌酸酶表面 | 第31-37页 |
| 3.2.1 肌酸酶分子表面极性氨基酸的分析 | 第31-33页 |
| 3.2.2 多聚赖氨酸修饰肌酸酶的条件优化 | 第33-34页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE鉴定修饰效果 | 第34-35页 |
| 3.2.4 修饰前后肌酸酶的动力学参数分析 | 第35页 |
| 3.2.5 修饰前后肌酸酶的稳定性比较 | 第35-37页 |
| 3.3 肌酸酶亚基间二硫键构建对酶稳定性的影响研究 | 第37-45页 |
| 3.3.1 肌酸酶亚基间的二硫键的设计与构建 | 第37-39页 |
| 3.3.2 非还原SDS-PAGE鉴定亚基间二硫键形成的结果 | 第39-40页 |
| 3.3.3 二硫键改造前后肌酸酶的酶学性质比较 | 第40-41页 |
| 3.3.4 非共价亚基改造成共价结合态后对酶分子结构的影响 | 第41-45页 |
| 主要结论及展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52-53页 |
| 缩略词表 | 第53页 |
