| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一章 实验材料 | 第15-22页 |
| 1. 组织样本来源 | 第15页 |
| 2. 细胞系 | 第15页 |
| 3. hsa-miR-646 mimics、inhibitors、质粒及慢病毒 | 第15页 |
| 4. 原位杂交探针 | 第15-16页 |
| 5. 主要试剂 | 第16-18页 |
| 6. 主要设备 | 第18-20页 |
| 7. 相关试剂的配制 | 第20-22页 |
| 第二章 实验方法 | 第22-45页 |
| 1. 细胞培养和冻存、复苏 | 第22页 |
| 2. miR-646 mimics或inhibitors瞬时转染 | 第22-23页 |
| 3. 质粒瞬时转染 | 第23页 |
| 4. 慢病毒感染细胞 | 第23页 |
| 5. EdU增殖实验 | 第23-24页 |
| 6. 软琼脂克隆形成实验 | 第24-25页 |
| 7. 细胞侵袭实验 | 第25页 |
| 8. 细胞划痕实验 | 第25-26页 |
| 9. 细胞总蛋白的提取 | 第26页 |
| 10. BCA法测定蛋白浓度 | 第26-27页 |
| 11. Western blot分析鉴定蛋白 | 第27-29页 |
| 12. 免疫荧光实验 | 第29-30页 |
| 13. 荧光素鬼笔环肽染色 | 第30页 |
| 14. 组织标本处理(胃癌组织、裸鼠原位瘤及肺脏) | 第30-31页 |
| 15. 免疫组化 | 第31-32页 |
| 16. 原位杂交(石蜡切片) | 第32页 |
| 17. 质粒转化 | 第32-33页 |
| 18. 质粒扩增与提取 | 第33-34页 |
| 19. 细胞或组织中总RNA抽提 | 第34页 |
| 20. cDNA逆转录 | 第34页 |
| 21. miRNA逆转录 | 第34-35页 |
| 22. 普通PCR反应 | 第35-36页 |
| 23. miRNA qPCR反应 | 第36页 |
| 24. 普通基因的qPCR反应 | 第36-37页 |
| 25. 琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 26. 重组质粒的构建 | 第37-40页 |
| 27. 定点突变 | 第40-41页 |
| 28. 双荧光素酶报告基因检测 | 第41-42页 |
| 29. 裸鼠皮下瘤模型 | 第42-43页 |
| 30. 尾静脉注射肺转移模型 | 第43页 |
| 31. 统计学分析 | 第43-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-66页 |
| 1. miR-646在胃癌细胞和胃癌组织中表达下调 | 第45-48页 |
| 2. miR-646抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及转移 | 第48-50页 |
| 3. miR-646参与胃癌细胞的EMT | 第50-52页 |
| 4. miR-646可逆转rTGF-β诱导胃癌细胞的EMT | 第52-55页 |
| 5. miR-646能与FOXK1 mRNA 3'UTR区结合并抑制下游转录 | 第55-59页 |
| 6. miR-646靶向调控FOXK1调节胃癌细胞侵袭转移的分子机制 | 第59-63页 |
| 7. FOXK1对miR-646介导的胃癌细胞皮下成瘤及体内转移的影响 | 第63-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 在读期间发表的文章 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
