中文摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
1 引言 | 第10-11页 |
2 材料与方法 | 第11-31页 |
2.1 细胞系 | 第11页 |
2.2 裸鼠 | 第11页 |
2.3 主要实验试剂 | 第11-13页 |
2.4 主要实验仪器与设备 | 第13页 |
2.5 实验用相关试剂配制 | 第13-16页 |
2.5.1 含血清培养基(SCM,含 10%胎牛血清) | 第13页 |
2.5.2 细胞冻存液 | 第13-14页 |
2.5.3 4% soft agrose | 第14页 |
2.5.4 1.5M Tris-HCL(PH=6.8) | 第14页 |
2.5.5 1.5M Tris-HCl(pH8.8) | 第14页 |
2.5.6 RIPA Buffer | 第14页 |
2.5.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳液(SDS-PAGE) | 第14-15页 |
2.5.8 10%分离胶(15ml) | 第15-16页 |
2.5.9 配制 5%浓缩胶(6ml) | 第16页 |
2.5.10 10% AP | 第16页 |
2.5.11 盖玻片的预处理 | 第16页 |
2.6 实验方法 | 第16-31页 |
2.6.1 U87、U251、HA1800细胞的复苏、培养和传代 | 第16-17页 |
2.6.2 细胞爬片免疫荧光 | 第17-18页 |
2.6.3 CCK-8 细胞增殖实验 | 第18-19页 |
2.6.4 克隆形成实验 | 第19页 |
2.6.5 细胞及标本中蛋白提取及蛋白定量 | 第19-21页 |
2.6.6 蛋白质印记实验 | 第21-23页 |
2.6.6.1 蛋白上样、电泳 | 第21-22页 |
2.6.6.2 蛋白质转移到固相支持体 | 第22页 |
2.6.6.3 封闭非特异性结合位点 | 第22页 |
2.6.6.4 一抗 | 第22页 |
2.6.6.5 二抗 | 第22页 |
2.6.6.6 ECL发光检测 | 第22-23页 |
2.6.7 动物实验 | 第23页 |
2.6.8 免疫组化实验 | 第23-25页 |
2.6.9 USP17过表达慢病毒载体构建与包装 | 第25-30页 |
2.6.9.1 设计并合成引物 | 第25-26页 |
2.6.9.2 载体的双酶切 | 第26页 |
2.6.9.3 目的片段的扩增及酶切 | 第26-27页 |
2.6.9.4 过表达载体与目的片段的连接 | 第27-28页 |
2.6.9.5 转化 | 第28页 |
2.6.9.6 PCR鉴定 | 第28页 |
2.6.9.7 慢病毒包装 | 第28-29页 |
2.6.9.8.Lentivirus滴度测定 | 第29-30页 |
2.6.10 统计学处理 | 第30-31页 |
3 结果 | 第31-37页 |
3.1 胶质瘤标本中及胶质瘤细胞系中USP17表达量 | 第31-32页 |
3.2 免疫荧光染色观察USP17在细胞中表达的部位 | 第32页 |
3.3 CCK8观察稳定过表达细胞系及未处理细胞系的增殖能力 | 第32-33页 |
3.4 CCK8观察稳定的敲减组细胞系增殖情况 | 第33-34页 |
3.5 平板克隆实验观察细胞生长情况 | 第34页 |
3.6 Ras蛋白和Myc蛋白表达水平降低 | 第34-35页 |
3.7 动物实验 | 第35-36页 |
3.8 免疫组化 | 第36-37页 |
4 讨论 | 第37-39页 |
5 结论及展望 | 第39页 |
5.1 总结 | 第39页 |
5.2 展望 | 第39页 |
6 参考文献 | 第39-42页 |
致谢 | 第42-43页 |
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第43-44页 |
综述 胶质瘤的分子靶向治疗研究现状及进展 | 第44-53页 |
参考文献 | 第49-53页 |
缩略语表 | 第53页 |