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去泛素化酶USP17对胶质瘤功能的影响及其机制研究

中文摘要第6-8页
Abstract第8-9页
1 引言第10-11页
2 材料与方法第11-31页
    2.1 细胞系第11页
    2.2 裸鼠第11页
    2.3 主要实验试剂第11-13页
    2.4 主要实验仪器与设备第13页
    2.5 实验用相关试剂配制第13-16页
        2.5.1 含血清培养基(SCM,含 10%胎牛血清)第13页
        2.5.2 细胞冻存液第13-14页
        2.5.3 4% soft agrose第14页
        2.5.4 1.5M Tris-HCL(PH=6.8)第14页
        2.5.5 1.5M Tris-HCl(pH8.8)第14页
        2.5.6 RIPA Buffer第14页
        2.5.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳液(SDS-PAGE)第14-15页
        2.5.8 10%分离胶(15ml)第15-16页
        2.5.9 配制 5%浓缩胶(6ml)第16页
        2.5.10 10% AP第16页
        2.5.11 盖玻片的预处理第16页
    2.6 实验方法第16-31页
        2.6.1 U87、U251、HA1800细胞的复苏、培养和传代第16-17页
        2.6.2 细胞爬片免疫荧光第17-18页
        2.6.3 CCK-8 细胞增殖实验第18-19页
        2.6.4 克隆形成实验第19页
        2.6.5 细胞及标本中蛋白提取及蛋白定量第19-21页
        2.6.6 蛋白质印记实验第21-23页
            2.6.6.1 蛋白上样、电泳第21-22页
            2.6.6.2 蛋白质转移到固相支持体第22页
            2.6.6.3 封闭非特异性结合位点第22页
            2.6.6.4 一抗第22页
            2.6.6.5 二抗第22页
            2.6.6.6 ECL发光检测第22-23页
        2.6.7 动物实验第23页
        2.6.8 免疫组化实验第23-25页
        2.6.9 USP17过表达慢病毒载体构建与包装第25-30页
            2.6.9.1 设计并合成引物第25-26页
            2.6.9.2 载体的双酶切第26页
            2.6.9.3 目的片段的扩增及酶切第26-27页
            2.6.9.4 过表达载体与目的片段的连接第27-28页
            2.6.9.5 转化第28页
            2.6.9.6 PCR鉴定第28页
            2.6.9.7 慢病毒包装第28-29页
            2.6.9.8.Lentivirus滴度测定第29-30页
        2.6.10 统计学处理第30-31页
3 结果第31-37页
    3.1 胶质瘤标本中及胶质瘤细胞系中USP17表达量第31-32页
    3.2 免疫荧光染色观察USP17在细胞中表达的部位第32页
    3.3 CCK8观察稳定过表达细胞系及未处理细胞系的增殖能力第32-33页
    3.4 CCK8观察稳定的敲减组细胞系增殖情况第33-34页
    3.5 平板克隆实验观察细胞生长情况第34页
    3.6 Ras蛋白和Myc蛋白表达水平降低第34-35页
    3.7 动物实验第35-36页
    3.8 免疫组化第36-37页
4 讨论第37-39页
5 结论及展望第39页
    5.1 总结第39页
    5.2 展望第39页
6 参考文献第39-42页
致谢第42-43页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第43-44页
综述 胶质瘤的分子靶向治疗研究现状及进展第44-53页
    参考文献第49-53页
缩略语表第53页

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