| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第15-35页 |
| 一、植原体及植原体病害的研究概况 | 第15-16页 |
| 二、植原体检测与鉴定技术研究概况 | 第16-22页 |
| 1. 植物症状识别与药物辅助诊断 | 第16页 |
| 2. 显微检测技术 | 第16-17页 |
| 3. 血清学检测技术 | 第17-18页 |
| 4. 核酸杂交检测技术 | 第18-19页 |
| 5. PCR检测技术 | 第19-21页 |
| 6. 其它检测技术 | 第21-22页 |
| 三、植原体分类研究概况 | 第22-27页 |
| 1. 植原体的系统分类学地位与分类研究现状 | 第22-23页 |
| 2. 基于植原体生物学特性及其与介体昆虫关系的分类 | 第23页 |
| 3. 基于血清学特征的分类 | 第23-24页 |
| 4. 基于分子生物学特征的分类 | 第24-27页 |
| 四、植原体致病机理研究概况 | 第27-32页 |
| 1. 植原体侵染引起寄主植物组织细胞水平的变化 | 第27页 |
| 2. 植原体侵染引起寄主植物生理生化水平的变化 | 第27-29页 |
| 3. 植原体与寄主互作的分子生物学机制 | 第29-31页 |
| 4. 植原体胸苷酸激酶研究概况 | 第31-32页 |
| 五、本研究的主要内容、目的及意义 | 第32-35页 |
| 第一章 南京几种植原体的检测、鉴定及病害调查 | 第35-81页 |
| 第一节 二月蓝黄矮病植原体的检测与鉴定 | 第35-53页 |
| 前言 | 第35-36页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第36-37页 |
| 1.2 DAPI染色观察 | 第37页 |
| 1.3 患病及健康二月蓝植株总DNA的提取 | 第37-38页 |
| 1.4 引物合成 | 第38页 |
| 1.5 直接PCR与巢式PCR | 第38-40页 |
| 1.6 PCR扩增产物的回收与克隆 | 第40-41页 |
| 1.7 目的片段的测序与序列同源性比较 | 第41页 |
| 1.8 16S rDNA序列的虚拟RFLP分析 | 第41页 |
| 1.9 目的基因序列的系统发育学分析 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-49页 |
| 2.1 二月蓝植株感染植原体后的症状 | 第41-42页 |
| 2.2 二月蓝黄矮病植原体的DAPI染色 | 第42页 |
| 2.3 二月蓝黄矮病植原体16S rDNA、rp、tuf及secY基因的PCR扩增_ | 第42-43页 |
| 2.4 二月蓝黄矮病植原体16S rDNA、rp、tuf及secY基因序列同源性比对分析 | 第43-44页 |
| 2.5 二月蓝黄矮病植原体16Sr DNA的虚拟RFLP分析结果 | 第44-45页 |
| 2.6 二月蓝黄矮病植原体16Sr DNA、rp、tuf及secY基因系统进化树构建与分析 | 第45-49页 |
| 3 小结与讨论 | 第49-53页 |
| 第二节 铜钱树丛枝病植原体的检测与鉴定 | 第53-63页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 1 材料与方法 | 第54-55页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第54页 |
| 1.2 患病及健康铜钱树植株总DNA的提取 | 第54页 |
| 1.3 引物合成 | 第54页 |
| 1.4 直接PCR与巢式PCR | 第54页 |
| 1.5 PCR扩增产物的回收与克隆 | 第54页 |
| 1.6 目的片段的测序与序列同源性比较 | 第54-55页 |
| 1.7 铜钱树丛枝病植原体16S rDNA序列的虚拟RFLP分析 | 第55页 |
| 1.8 铜钱树丛枝病植原体相关基因序列的系统发育学分析 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-61页 |
| 2.1 铜钱树植株感染植原体后的症状 | 第55页 |
| 2.2 铜钱树丛枝病植原体16S rDNA、rp及secA基因的PCR扩增 | 第55-56页 |
| 2.3 铜钱树丛枝病植原体16S rDNA、rp及secA基因序列同源性比对与分析 | 第56页 |
| 2.4 铜钱树丛枝病植原体16Sr DNA的虚拟RFLP分析 | 第56-57页 |
| 2.5 铜钱树丛枝病植原体16Sr DNA、rp及secA基因系统进化树构建与分析 | 第57-61页 |
| 3. 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第三节 棕榈致死黄化病等几种植原体的16S rDNA检测与虚拟RFLP分析 | 第63-73页 |
| 前言 | 第63-66页 |
| 1 材料与方法 | 第66页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第66页 |
| 1.2 患病及健康植株总DNA的提取 | 第66页 |
| 1.3 引物合成 | 第66页 |
| 1.4 直接PCR与巢式PCR | 第66页 |
| 1.5 PCR扩增产物的回收与克隆 | 第66页 |
| 1.6 目的片段的测序与序列同源性比较 | 第66页 |
| 1.7 16S rDNA序列的虚拟RFLP分析 | 第66页 |
| 1.8 相关基因序列的系统发育学分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-71页 |
| 2.1 感病植株的症状 | 第66-67页 |
| 2.2 感病植株中植原体16S rDNA的PCR扩增 | 第67页 |
| 2.3 植原体16S rDNA序列同源性比对与系统发育学分析 | 第67-70页 |
| 2.4 植原体16S rDNA序列的虚拟RFLP图谱分析 | 第70-71页 |
| 3 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 第四节 基于Maxent的16S rV组植原体在南京市的适生性分析 | 第73-79页 |
| 前言 | 第73-74页 |
| 1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 1.1 材料 | 第74页 |
| 1.2 方法 | 第74-75页 |
| 1.2.1 模型预测及分析 | 第74-75页 |
| 1.2.2 模型预测结果评价 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-77页 |
| 2.1 Maxent模型预测的潜在分布区 | 第75-76页 |
| 2.2 生物学气候变量对16S rV组植原体适生范围的影响 | 第76-77页 |
| 2.3 Maxent模型预测能力的评价 | 第77页 |
| 2.4 16SrV组植原体在南京的实际调查分析 | 第77页 |
| 3 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 本章小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第二章 感染植原体的铜钱树生理学变化研究 | 第81-95页 |
| 前言 | 第81-82页 |
| 1 材料与方法 | 第82-85页 |
| 1.1 材料 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-85页 |
| 1.2.1 酶活性测定 | 第82-84页 |
| 1.2.1.1 过氧化氢酶(CAT)活性测定 | 第82-83页 |
| 1.2.1.2 过氧化物酶(POD)活性测定 | 第83页 |
| 1.2.1.3 多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第83-84页 |
| 1.2.1.4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 | 第84页 |
| 1.2.1.5 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定 | 第84页 |
| 1.2.1.6 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第84页 |
| 1.2.2 丙二醛含量测定 | 第84-85页 |
| 1.2.3 可溶性总糖含量测定 | 第85页 |
| 1.2.4 可溶性蛋白质含量测定 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-91页 |
| 2.1 过氧化氢酶(CAT)活性变化 | 第85-86页 |
| 2.2 过氧化物酶(POD)活性变化 | 第86-87页 |
| 2.3 多酚氧化酶(PPO)活性变化 | 第87页 |
| 2.4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化 | 第87-88页 |
| 2.5 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性变化 | 第88页 |
| 2.6 超氧化物歧化酶(SOD)活性变化 | 第88-89页 |
| 2.7 丙二醛含量变化 | 第89页 |
| 2.8 可溶性总糖含量变化 | 第89-90页 |
| 2.9 可溶性蛋白质含量变化 | 第90-91页 |
| 3. 小结与讨论 | 第91-95页 |
| 第三章 铜钱树丛枝病植原体胸苷酸激酶基因(tmk)的克隆与外源表达分析 | 第95-107页 |
| 前言 | 第95-96页 |
| 1 材料与方法 | 第96-101页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第96页 |
| 1.2 方法 | 第96-101页 |
| 1.2.1 患病植株总DNA的提取 | 第96页 |
| 1.2.2 植原体胸苷酸激酶基因(tmk)的PCR扩增 | 第96-97页 |
| 1.2.3 目的产物的纯化回收 | 第97页 |
| 1.2.4 重组表达载体的构建 | 第97-99页 |
| 1.2.5 重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第99页 |
| 1.2.6 表达菌体的超声破碎与SDS-PAGE电泳检测 | 第99-100页 |
| 1.2.7 融合表达蛋白的纯化 | 第100-101页 |
| 1.2.8 纯化的融合表达蛋白浓度测定 | 第101页 |
| 1.2.9 TMK酶活性测定 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-104页 |
| 2.1 植原体tmk基因的PCR扩增与质粒pET-28a(+)的提取 | 第101-102页 |
| 2.2 重组表达载体pET-28a(+)-tmk的构建及验证 | 第102页 |
| 2.3 融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第102-104页 |
| 2.4 纯化蛋白浓度测定 | 第104页 |
| 2.5 TMK蛋白酶活性分析 | 第104页 |
| 3 小结与讨论 | 第104-107页 |
| 全文总结 | 第107-111页 |
| 一、本文主要研究结果 | 第107-108页 |
| 二、本文的主要创新点 | 第108页 |
| 三、尚待解决的问题 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-129页 |
| 附表 | 第129-133页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
