| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-26页 |
| 第一章 卵泡闭锁研究进展 | 第10-16页 |
| 1 卵泡闭锁及研究 | 第10-13页 |
| 1.1 卵泡闭锁 | 第10页 |
| 1.2 卵泡闭锁的机制研究 | 第10-13页 |
| 2 卵泡闭锁的研究意义 | 第13-14页 |
| 参考文献 | 第14-16页 |
| 第二章 miRNA及其调控细胞凋亡研究进展 | 第16-26页 |
| 1 miRNA研究概况 | 第16-21页 |
| 2 let-7 miRNA家族 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-26页 |
| 第二篇 试验部分 | 第26-74页 |
| 第一章 猪卵泡闭锁过程中let-7家族的表达分析 | 第26-44页 |
| 1 材料和方法 | 第26-33页 |
| 1.1 猪卵泡的分离以及形态学鉴定 | 第26页 |
| 1.2 卵泡液孕激素、雌激素含量测定 | 第26页 |
| 1.3 卵泡总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 1.4 茎环引物的设计及miRNA反转录cDNA的合成 | 第27-29页 |
| 1.5 聚合酶链式反应(PCR)及TA克隆 | 第29-31页 |
| 1.6 实时定量PCR( Realtime-PCR) | 第31页 |
| 1.7 颗粒细胞的培养及转染 | 第31-32页 |
| 1.8 流式细胞术 | 第32-33页 |
| 1.9 数据分析 | 第33页 |
| 2 试验结果 | 第33-40页 |
| 2.1 猪卵巢卵泡不同闭锁程度特征 | 第33-34页 |
| 2.2 let-7 miRNA家族芯片结果分析 | 第34-36页 |
| 2.3 茎环引物反转录let-7 miRNA家族特异性验证 | 第36-37页 |
| 2.4 let-7 miRNA家族在卵泡闭锁过程的表达分析 | 第37-38页 |
| 2.5 凋亡分析 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 第二章 let-7g调控猪颗粒细胞凋亡机制研究 | 第44-74页 |
| 1 材料和方法 | 第44-58页 |
| 1.1 颗粒细胞的体外培养及转染 | 第44页 |
| 1.2 细胞总RNA提取及实时定量PCR | 第44-46页 |
| 1.3 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第46-49页 |
| 1.4 免疫荧光染色 | 第49-50页 |
| 1.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第50-57页 |
| 1.6 凋亡分析 | 第57-58页 |
| 1.7 数据分析 | 第58页 |
| 2 实验结果 | 第58-70页 |
| 2.1 let-7g转染后凋亡相关基因变化 | 第58-59页 |
| 2.2 let-7g转染后FoxO1变化 | 第59-63页 |
| 2.3 let-7g靶基因MAP3K1的验证 | 第63-66页 |
| 2.4 MAP3K1基因功能验证 | 第66-68页 |
| 2.5 siRNA敲减MAP3K1后FoxO1的变化 | 第68-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-74页 |
| 全文结论 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
