| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-21页 |
| 1 抗菌肽的研究进展 | 第9-16页 |
| 1.1 抗菌肽的基本结构 | 第9-10页 |
| 1.2 抗菌肽种类划分 | 第10-11页 |
| 1.2.1 按合成的途径分 | 第10页 |
| 1.2.2 空间结构分类 | 第10页 |
| 1.2.3 按照抗菌肽分布的物种分 | 第10-11页 |
| 1.3 抗菌肽的作用机理 | 第11-14页 |
| 1.3.1 抗菌肽抗细菌的功能 | 第11-12页 |
| 1.3.2 抗菌肽抗真菌的功能 | 第12页 |
| 1.3.3 抗菌肽抗肿瘤的功能 | 第12-13页 |
| 1.3.4 抗菌肽抗病毒的功能 | 第13页 |
| 1.3.5 抗菌肽抗寄生虫的作用 | 第13-14页 |
| 1.3.6 抗菌肽相互间的协同作用 | 第14页 |
| 1.4 抗菌肽表达的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4.1 抗菌肽的表达策略 | 第14页 |
| 1.4.2 抗菌肽的原核表达体系 | 第14-15页 |
| 1.4.3 抗菌肽的真核表达体系 | 第15-16页 |
| 1.5 抗菌肽的分离纯化研究进展 | 第16页 |
| 2 抗菌肽LEAP-2介绍 | 第16-21页 |
| 2.1 LEAP-2基因的组成及主要表达部位 | 第17页 |
| 2.2 抗菌肽LEAP-2的蛋白质结构 | 第17-18页 |
| 2.3 LEAP-2基因被诱导表达的机理 | 第18-19页 |
| 2.4 LEAP-2的抗菌活性 | 第19页 |
| 2.5 抗菌肽LEAP-2的应用前景 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-34页 |
| 1 试验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 试验动物 | 第21页 |
| 1.2 试验主要试剂 | 第21页 |
| 1.3 配制主要的试剂 | 第21-22页 |
| 1.4 引物设计 | 第22-23页 |
| 1.5 主要仪器 | 第23页 |
| 2 试验方法 | 第23-34页 |
| 2.1 鸡LEAP-2信号肽及一级结构预测 | 第23-24页 |
| 2.2 肉鸡肝脏总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.3 反转录合成cDNA | 第24-25页 |
| 2.4 PCR扩增肉鸡LEAP-2基因序列 | 第25页 |
| 2.5 目的产物胶回收 | 第25-26页 |
| 2.6 目的片段与pGEX-6P-1载体的连接、转化及阳性质粒的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.6.1 LEAP-2基因的双酶切 | 第26页 |
| 2.6.2 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.6.3 pGEX-6P-1的酶切 | 第27页 |
| 2.6.4 双酶切胶回收后LEAP-2基因与载体pGEX-6P-1的连接 | 第27-29页 |
| 2.6.5 pGEX-6P-1-LEAP-2转化大肠杆菌DH5a | 第29页 |
| 2.6.6 阳性质粒的鉴定 | 第29页 |
| 2.7 重组表达质粒pGEX-6P-1-LEAP-2转化BL21感受态细胞 | 第29页 |
| 2.8 诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.9 诱导表达条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.9.1 最适IPTG诱导浓度的确定 | 第30页 |
| 2.9.2 最适诱导时间的确定 | 第30页 |
| 2.9.3 最适诱导温度的确定 | 第30-31页 |
| 2.10 融合蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.10.1 工程菌大量表达 | 第31页 |
| 2.10.2 pGEX-6P-1-LEAP-2融合蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.10.3 融合蛋白GST-LEAP-2标签的切割和抗菌肽的收集 | 第32页 |
| 2.11 融合蛋白GST-LEAP-2和鸡抗菌肽LEAP-2 SDS-PAGE电泳鉴定 | 第32页 |
| 2.12 Western Blot检测 | 第32-33页 |
| 2.13 鸡LEAP-2抗菌肽体外抗菌活性检测 | 第33-34页 |
| 结果与分析 | 第34-46页 |
| 1 抗菌肽LEAP-2的一级结构分析及信号肽预测 | 第34-35页 |
| 2 肉鸡肝脏组织总RNA的提取 | 第35页 |
| 3 PCR扩增鸡LEAP-2 DNA | 第35-36页 |
| 4 构建pGEX-6P-1-LEAP-2原核表达载体 | 第36-38页 |
| 5 抗菌肽LEAP-2融合蛋白诱导表达实验结果 | 第38-42页 |
| 5.1 筛选最佳诱导表达的IPTG浓度 | 第39-40页 |
| 5.2 诱导不同时间对LEAP-2融合蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 5.3 不同温度下诱导对LEAP-2融合蛋白表达的影响结果 | 第41-42页 |
| 6 重组融合蛋白大量表达和纯化 | 第42-43页 |
| 7 Western Blot鉴定LEAP-2融合蛋白纯化产物 | 第43-44页 |
| 8 鸡抗菌肽LEAP-2体外抗菌活性检测 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 1 目的基因的获得 | 第46页 |
| 2 融合表达体系的选择 | 第46-47页 |
| 3 表达条件的优化 | 第47页 |
| 4 鸡抗菌肽LEAP-2的抗菌活性 | 第47-49页 |
| 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| Abstract | 第54页 |
| 致谢 | 第56页 |
