| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-12页 |
| ·大丽轮枝菌的生物学特性 | 第8页 |
| ·大丽轮枝菌的致病机理 | 第8-9页 |
| ·DNA甲基化 | 第9-10页 |
| ·真菌基因敲除技术 | 第10-11页 |
| ·研究目的和意义 | 第11-12页 |
| 第二章 材料与方法 | 第12-27页 |
| ·实验材料 | 第12-13页 |
| ·菌株与质粒 | 第12页 |
| ·实验仪器 | 第12-13页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第13-15页 |
| ·主要试剂的配置 | 第13页 |
| ·主要培养基的配制 | 第13-14页 |
| ·抗生素的配制及使用浓度 | 第14-15页 |
| ·大丽轮枝菌基因敲除质粒构建方法 | 第15-22页 |
| ·大丽轮枝菌基因组DNA的提取 | 第15页 |
| ·质粒pUCHyg、p GKO2-Gateway的提取 | 第15-16页 |
| ·靶标基因同源重组片段的构建 | 第16-20页 |
| ·重组质粒的构建 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的转化 | 第21页 |
| ·阳性克隆的筛选和验证 | 第21-22页 |
| ·农杆菌介导转化大丽轮枝菌 | 第22-25页 |
| ·质粒pGKO-DIM转化农杆菌 | 第22-23页 |
| ·大丽轮枝菌的遗传转化 | 第23-24页 |
| ·突变体转化子的单孢分离 | 第24页 |
| ·突变体基因组DNA快速提取与PCR检测 | 第24-25页 |
| ·VdDIM-2 基因缺失突变体的生物学表型分析 | 第25-27页 |
| ·突变体?VdDIM-2 菌株的菌落形态和生长状况 | 第25页 |
| ·突变体?VdDIM-2 菌株对棉株侵染力的测定 | 第25-27页 |
| 第三章 结果及分析 | 第27-34页 |
| ·大丽轮枝菌VdDIM-2 甲基转移酶编码基因的电子克隆 | 第27-28页 |
| ·大丽轮枝菌VdDIM-2 编码基因的电子克隆 | 第27页 |
| ·大丽轮枝菌VdLs.17和Vd991中VdDIM-2 氨基酸序列的比对 | 第27-28页 |
| ·大丽轮枝菌基因组DNA提取及检测 | 第28页 |
| ·质粒pUC-Hyg、pGKO2-Gateway DNA的检测 | 第28-29页 |
| ·大丽轮枝菌突变体菌株的构建 | 第29-31页 |
| ·基因敲除载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·大丽轮枝菌突变体的分子生物学验证 | 第30-31页 |
| ·突变体?VdDIM-2 的生物学表型分析 | 第31-34页 |
| ·不同培养基上突变体菌株形态及生长速率的测定 | 第31-32页 |
| ·不同菌株产孢量的分析及孢子形态观察 | 第32-33页 |
| ·突变体?VdDIM-2 菌株对棉花的致病性分析 | 第33-34页 |
| 第四章 讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-40页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41页 |
