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C/EBPβ基因在子宫颈癌组织和子宫颈癌细胞表达及意义的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
主要符号、缩略词、术语等注释说明表第10-11页
前言第11-13页
一 材料和方法第13-27页
   ·材料第13-14页
     ·标本第13页
     ·试剂第13-14页
     ·主要仪器设备第14页
   ·免疫组化检测C/EBPβ蛋白质在子宫颈癌组织中的表达第14-15页
     ·石蜡切片制备第14-15页
     ·用SP 法免疫组化染色检测C/EBPβ蛋白蛋白的表达第15页
     ·判断标准第15页
     ·统计学处理第15页
   ·实时定量PCR 实验第15-19页
     ·引物序列(2OD ,PAGE 级)第15-16页
     ·样本Total RNA 提取- Trizol 法提取组织、细胞Total RNA第16页
     ·Total RNA 质量检测第16-17页
     ·DNaseI 消化基因组DNA第17页
     ·总RNA 纯化第17页
     ·Total RNA 纯化效果验证第17-18页
     ·Total RNA 消化效果验证第18页
     ·RNA 逆转录- Oligo(dT)15 法RNA 逆转录第18-19页
     ·RealTime PCR 反应第19页
   ·C/EBPβ基因克隆载体的构建第19-23页
     ·实验流程描述第19-20页
     ·载体的线性化第20页
     ·目的基因片段的获取第20-21页
     ·重组克隆制备第21-23页
     ·阳性克隆的PCR 鉴定第23页
   ·子宫颈癌HeLa 细胞的复苏、传代及转染第23-25页
     ·细胞复苏第23-24页
     ·细胞的换液第24页
     ·细胞的传代第24页
     ·细胞的冻存第24页
     ·细胞转染第24-25页
   ·免疫组织化学法检测 HeLa 细胞中的表达第25页
     ·细胞爬片第25页
     ·免疫组织化学染色第25页
   ·共聚焦显微镜检测HeLa 细胞中的表达第25页
     ·细胞爬片第25页
     ·激光共聚焦显微镜检测第25页
   ·MTT 法测定重组质粒组、空载体组、空白对照组HeLa 细胞存活数量第25-26页
     ·原理第25页
     ·方法第25-26页
   ·AnnexinV/PI 双色法流式细胞仪检测转导HeLa 细胞凋亡的影响第26-27页
     ·方法第26-27页
二 结果第27-41页
   ·免疫组化分析C/EBPβ蛋白在子宫颈组织中的表达第27-29页
     ·新疆地区维吾尔族、汉族子宫颈组织C/EBPβ蛋白检测结果分析第28页
     ·新疆维吾尔族、汉族子宫颈癌组织C/EBPβ蛋白表达与病理分级的关系第28页
     ·新疆维吾尔族、汉族子宫颈癌组织C/EBPβ蛋白表达与临床分期的关系第28-29页
   ·C/EBPβ基因在子宫颈癌组织中转录水平的表达第29-33页
     ·RealTime RT-PCR 产物电泳检测第29-30页
     ·看家基因扩增曲线图第30-31页
     ·看家基因溶解曲线图第31-33页
   ·目的基因过表达载体构建、测序结果第33-37页
     ·PCR 扩增目的基因图第33页
     ·PCR 片段的酶切图第33-34页
     ·C/EBPβ5’测序结果第34-37页
   ·真核转染实验验证CEBPβ基因功能第37-41页
     ·免疫组织化学检测转染后CEBPβ基因蛋白质表达水平第37-38页
     ·转染后激光共聚焦检测结果第38页
     ·真核转染HeLa 细胞后MTT 结果第38-39页
     ·AnnexinV/PI 双色法流式细胞仪检测细胞凋亡率第39-41页
三 讨论第41-45页
四 结论第45-46页
参考文献第46-49页
文献综述第49-54页
 参考文献第52-54页
附录一第54-59页
附录二第59-61页
致谢第61-62页
作者简历第62页

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