火龙果CAT基因在烟草中的遗传转化及功能分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 名词缩写表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-23页 |
| ·逆境胁迫对植物生长的影响 | 第10-11页 |
| ·干旱胁迫对植物生长的影响 | 第10-11页 |
| ·低温胁迫对植物生长的影响 | 第11页 |
| ·植物适应逆境胁迫的机制 | 第11-17页 |
| ·植物适应逆境胁迫的形态机制 | 第11-12页 |
| ·植物适应逆境胁迫的生理生化机制 | 第12-15页 |
| ·植物逆境胁迫下的基因应答机制 | 第15-17页 |
| ·过氧化氢酶与植物抗逆性 | 第17-19页 |
| ·过氧化氢酶的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·过氧化氢酶的抗氧化作用 | 第18页 |
| ·CAT基因工程研究 | 第18-19页 |
| ·基因的功能验证 | 第19-20页 |
| ·基因的超表达用于功能验证 | 第19-20页 |
| ·基因失活在基因功能分析的作用 | 第20页 |
| ·火龙果的抗逆相关基因 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的、意义及技术路线 | 第21-23页 |
| ·目的与意义 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-47页 |
| ·试验材料 | 第23页 |
| ·试验材料 | 第23页 |
| ·干旱胁迫 | 第23页 |
| ·低温胁迫 | 第23页 |
| ·实验试剂及仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·HuCAT基因植物表达载体构建 | 第24-33页 |
| ·添加酶切位点的引物设计 | 第24-25页 |
| ·中间表达载体的构建 | 第25-29页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·植物表达载体导入农杆菌LBA4404 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导烟草遗传转化 | 第33-36页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·烟草叶片材料的处理 | 第33页 |
| ·农杆菌的培养及活化 | 第33-34页 |
| ·HuCAT遗传转化烟草 | 第34页 |
| ·GUS组织化学染色检测 | 第34页 |
| ·PCR分子检测 | 第34-36页 |
| ·转基因植株中HuCAT基因的表达分析 | 第36-40页 |
| ·PCR模板制备 | 第36-38页 |
| ·半定量RT-PCR | 第38页 |
| ·荧光定量PCR | 第38-40页 |
| ·转基因烟草抗旱生理生化指标的测定 | 第40-46页 |
| ·水势 | 第40页 |
| ·相对含水量 | 第40-41页 |
| ·过氧化氢（H2O2）含量 | 第41页 |
| ·可溶性糖（SS）含量 | 第41-42页 |
| ·可溶性蛋白（SP）含量 | 第42页 |
| ·叶绿素含量 | 第42-43页 |
| ·过氧化氢酶（CAT）活性 | 第43页 |
| ·超氧化物歧化酶（SOD）活性 | 第43-44页 |
| ·过氧化物酶（POD）活性 | 第44-45页 |
| ·脯氨酸（PRO）含量 | 第45页 |
| ·丙二醛（MDA）含量 | 第45页 |
| ·相对电导率（REC） | 第45-46页 |
| ·转基因烟草抗寒生理生化指标的测定 | 第46页 |
| ·数据统计分析 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-70页 |
| ·HuCAT基因植物表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第47页 |
| ·HuCAT的T载体克隆与测序验证 | 第47-48页 |
| ·载体质粒双酶切 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导烟草遗传转化 | 第49-50页 |
| ·pSH737-HuCAT转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·HuCAT遗传转化烟草 | 第50页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第50-51页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第50-51页 |
| ·PCR检测 | 第51页 |
| ·HuCAT表达分析 | 第51-56页 |
| ·PCR模板的制备 | 第51-52页 |
| ·半定量RT-PCR检测 | 第52-54页 |
| ·HuCAT表达的荧光定量PCR检测 | 第54-56页 |
| ·干旱胁迫对转HuCAT烟草生长的影响 | 第56页 |
| ·干旱胁迫下生理生化指标的变化 | 第56-65页 |
| ·水势 | 第56-57页 |
| ·相对含水量 | 第57-58页 |
| ·过氧化氢（H202）含量 | 第58页 |
| ·可溶性糖（SS）含量 | 第58-59页 |
| ·可溶性蛋白（SP）含量 | 第59-60页 |
| ·叶绿素含量 | 第60-61页 |
| ·CAT活性 | 第61页 |
| ·SOD活性 | 第61-62页 |
| ·POD活性 | 第62-63页 |
| ·游离脯氨酸（PRO）含量 | 第63-64页 |
| ·丙二醛（MDA）含量 | 第64页 |
| ·相对电导率（REC） | 第64-65页 |
| ·低温胁迫对转HuCAT基因烟草形态的影响 | 第65页 |
| ·低温胁迫对生理生化指标的影响 | 第65-70页 |
| ·CAT活性 | 第65-66页 |
| ·SOD活性 | 第66-67页 |
| ·POD活性 | 第67页 |
| ·可溶性糖（SS）含量 | 第67-68页 |
| ·可溶性蛋白（SP）含量 | 第68页 |
| ·游离脯氨酸（PRO）含量 | 第68-69页 |
| ·丙二醛（MDA）含量 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| ·转基因烟草耐逆性的生理生化机制 | 第70-71页 |
| ·HuCAT基因的功能分析 | 第71-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 6 后续工作展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
