| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-12页 |
| 第一章 长期保存活力低下大肠杆菌感受态细胞制备条件的优化 | 第12-22页 |
| 1 前言 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-16页 |
| ·实验材料 | 第13-14页 |
| ·菌种与质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-16页 |
| ·提取pRI101-ON质粒 | 第14页 |
| ·溶液的配制 | 第14页 |
| ·活化菌种 | 第14-15页 |
| ·制备感受态细胞 | 第15-16页 |
| ·质粒转化 | 第16页 |
| ·计算 | 第16页 |
| 3 结果 | 第16-21页 |
| ·CaCl2溶液的处理方式对转化率的影响 | 第16-17页 |
| ·不同活化次数对转化率的影响 | 第17-19页 |
| ·不同离心时间对转化率的影响 | 第19-20页 |
| ·原始质粒与转化后质粒比对 | 第20-21页 |
| 4 讨论及结论 | 第21-22页 |
| ·CaCl2溶液的处理方式对转化率的影响分析 | 第21页 |
| ·不同活化次数对转化率的影响分析 | 第21-22页 |
| ·不同离心时间对转化率的影响分析 | 第22页 |
| 第二章 小立碗藓PpCalS12与NPR1基因的遗传转化 | 第22-57页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·植物材料及病原菌 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·小立碗藓DNA提取试剂 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第24页 |
| ·原生质体制备及PEG转化试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·小立碗藓原丝体的培养 | 第26页 |
| ·DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·载体的构建 | 第28-32页 |
| ·原生质体的制备 | 第32-33页 |
| ·突变植株的筛选 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-55页 |
| ·NPR1基因敲除载体的构建 | 第34-43页 |
| ·小立碗藓总DNA与原始质粒pTN182的检测 | 第34页 |
| ·NPR1基因上、下游同源臂PCR扩增产物检测 | 第34-35页 |
| ·NPR1基因上游同源臂插入及鉴定 | 第35-36页 |
| ·NPR1基因下游同源臂插入及鉴定 | 第36-39页 |
| ·测序验证构建载体 | 第39-43页 |
| ·PpCalS12基因敲除载体的构建 | 第43-53页 |
| ·小立碗藓总DNA、原始质pTN182检测 | 第43页 |
| ·PpCalS12基因上游同源臂PCR扩增产物测定 | 第43-44页 |
| ·PpCalS12基因上游同源臂插入及鉴定 | 第44-46页 |
| ·PpCalS12基因下游同源臂PCR扩增产物测定 | 第46页 |
| ·PpCalS12基因下游同源臂插入及鉴定 | 第46-48页 |
| ·测序验证构建载体 | 第48-53页 |
| ·原生质体的制备 | 第53-55页 |
| ·酶解原生质体 | 第53-54页 |
| ·PEG介导的遗传转化 | 第54页 |
| ·转化植株的筛选 | 第54-55页 |
| 4 讨论及结论 | 第55-57页 |
| ·小立碗藓NPR1基因载体的构建分析 | 第55-56页 |
| ·小立碗藓Pp CalS12基因载体的构建分析 | 第56页 |
| ·PEG介导的原生质体转化PpCal S12基因分析 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
