| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| ·参薯的简介 | 第9页 |
| ·参薯的研究进展 | 第9-11页 |
| ·花青素简介 | 第11-12页 |
| ·花青素的生理功能 | 第12-13页 |
| ·抗氧化活性 | 第12页 |
| ·保护肝脏 | 第12页 |
| ·抗突变 | 第12-13页 |
| ·预防心血管疾病 | 第13页 |
| ·其他作用 | 第13页 |
| ·花青素合成相关基因研究进展 | 第13-20页 |
| ·结构基因 | 第14-17页 |
| ·转录因子 | 第17-20页 |
| ·本研究目的及意义 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒与农杆菌菌株 | 第22页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| 3 实验方法 | 第24-39页 |
| ·参薯总RNA的提取及纯化 | 第24页 |
| ·参薯总RNA的纯化及检测 | 第24-25页 |
| ·参薯DaANS基因的扩增 | 第25-32页 |
| ·参薯DaANS基因保守序列的获取 | 第25-27页 |
| ·参薯DaANS基因3’端序列的获取 | 第27-29页 |
| ·参薯DaANS基因5’端序列的获取 | 第29-31页 |
| ·参薯DaANS基因全长cDNA扩增 | 第31-32页 |
| ·参薯DaANS基因基因组扩增 | 第32页 |
| ·参薯DaANS基因启动子的扩增 | 第32-33页 |
| ·参薯启动子文库的构建 | 第32页 |
| ·巢式PCR扩增DaANS基因启动子 | 第32-33页 |
| ·参薯DaANS基因的组织特异性表达 | 第33-35页 |
| ·模板的制备 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR | 第34-35页 |
| ·参薯DaANS基因的原核表达 | 第35-36页 |
| ·参薯DaANS基因的原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·参薯DaANS重组蛋白大量表达 | 第35-36页 |
| ·参薯DaANS基因的植物过量表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·参薯DaANS基因与载体的连接、转化 | 第36页 |
| ·重组子的筛选、测序 | 第36-37页 |
| ·参薯DaANS基因对烟草的遗传转化 | 第37-39页 |
| ·工程菌的制备 | 第37页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第37-38页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第38-39页 |
| 4 实验结果 | 第39-57页 |
| ·参薯块茎总RNA的提取 | 第39页 |
| ·参薯DaANS基因的扩增 | 第39-42页 |
| ·参薯DaANS基因保守序列的获得 | 第39-40页 |
| ·参薯DaANS基因3’端的获得 | 第40页 |
| ·参薯DaANS基因5’端的获得 | 第40-41页 |
| ·参薯DaANS基因cDNA全长以及内含子的获得 | 第41-42页 |
| ·参薯DaANS基因生物信息学分析 | 第42-49页 |
| ·参薯DaANS基因ORF预测以及编码氨基酸序列 | 第42页 |
| ·参薯DaANS蛋白质一级结构预测分析 | 第42-43页 |
| ·参薯DaANS蛋白质亚细胞定位、结构域分析及其功能预测 | 第43-45页 |
| ·参薯DaANS蛋白质信号肽、疏水性及跨膜区预测 | 第45-47页 |
| ·参薯DaANS蛋白的同源性及进化分析 | 第47-49页 |
| ·参薯DaANS基因启动子的扩增 | 第49-51页 |
| ·巢式PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| ·参薯DaANS基因启动子的序列分析 | 第50-51页 |
| ·参薯DaANS基因表达分析 | 第51-53页 |
| ·参薯DaANS基因不同组织的表达量分析 | 第51-52页 |
| ·参薯块茎不同月份DaANS基因的表达量分析 | 第52页 |
| ·参薯DaANS基因在不同品系的表达量分析 | 第52-53页 |
| ·参薯DaANS基因原核表达 | 第53-54页 |
| ·参薯DaANS基因的原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·参薯DaANS重组蛋白大量表达 | 第54页 |
| ·参薯DaANS基因真核表达 | 第54-57页 |
| ·PCXSN-35S-DaANS载体的构建 | 第54-55页 |
| ·参薯DaANS基因转化烟草 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草检测 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-60页 |
| ·DaANS基因克隆及生物信息学分析 | 第57页 |
| ·DaANS基因启动子克隆及功能分析 | 第57-58页 |
| ·DaANS基因组织特异性表达 | 第58-59页 |
| ·载体pCXSN-35S-DaANS构建及其对烟草的转化 | 第59-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 缩略词表 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |