| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| ·手性醇简介 | 第8-9页 |
| ·手性化合物 | 第8页 |
| ·手性醇 | 第8-9页 |
| ·(R)2氯1(3-氯苯基)乙醇 | 第9-11页 |
| ·(R)2氯1(3-氯苯基)乙醇简介 | 第9页 |
| ·(R)2氯1(3-氯苯基)乙醇的用途 | 第9-11页 |
| ·(R)2氯1(3-氯苯基)乙醇的合成方法 | 第11-12页 |
| ·化学法 | 第11页 |
| ·生物法 | 第11-12页 |
| ·辅酶循环策略 | 第12-15页 |
| ·底物偶联法 | 第13页 |
| ·酶偶联法 | 第13-15页 |
| ·密码子偏好性对异源蛋白表达的影响 | 第15-16页 |
| ·本论文的研究意义和研究内容 | 第16-18页 |
| ·研究基础 | 第16页 |
| ·本论文的研究意义 | 第16-17页 |
| ·本论文的研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶密码子优化及酶学研究 | 第18-31页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·工具酶与试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-26页 |
| ·基因Sys1 和Sygdh的合成 | 第20页 |
| ·重组表达质粒pET-22b-Sys1 和pET-28a-Sygdh的构建 | 第20-22页 |
| ·重组表达质粒的转化与筛选鉴定 | 第22-23页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶的诱导表达 | 第23页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶的纯化 | 第23页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第23页 |
| ·发酵液蛋白含量测定 | 第23-24页 |
| ·NADPH标准曲线的绘制 | 第24页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| ·酶学性质分析 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-31页 |
| ·羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶表达载体构建 | 第26-27页 |
| ·重组SyS1 和SyGDH的表达、鉴定和纯化 | 第27-28页 |
| ·蛋白含量与酶活测定 | 第28-29页 |
| ·酶学性质分析 | 第29-31页 |
| 第三章 羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达的研究 | 第31-41页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·菌株与质粒 | 第31页 |
| ·材料与试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·共表达质粒的构建 | 第31-34页 |
| ·SyS1 与SyGDH的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| ·共表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·重组菌的不对称催化反应 | 第35页 |
| ·酶活测定及产物检测方法 | 第35-36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-41页 |
| ·单质粒共表达体系的构建 | 第36-37页 |
| ·双质粒共表达体系的构建 | 第37页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶的表达 | 第37页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第37-39页 |
| ·辅酶再生验证 | 第39-41页 |
| 第四章 重组菌生物转化条件的优化研究 | 第41-50页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·材料与试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41-42页 |
| ·主要培养基 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·反应体系中助溶剂的选择 | 第42页 |
| ·反应体系中底物浓度的选择 | 第42页 |
| ·反应体系中菌体浓度的选择 | 第42页 |
| ·反应体系中pH的选择 | 第42-43页 |
| ·反应体系中温度的选择 | 第43页 |
| ·反应体系中葡萄糖浓度的选择 | 第43页 |
| ·反应体系中辅酶NADP+浓度的选择 | 第43页 |
| ·最适反应时间的选择 | 第43页 |
| ·产物的产率和e.e.值检测方法 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-50页 |
| ·不同助溶剂对生物催化反应的影响 | 第43-44页 |
| ·助溶剂二甲亚砜添加量对生物催化反应的影响 | 第44页 |
| ·不同底物浓度对生物催化反应的影响 | 第44-45页 |
| ·不同菌体浓度对生物催化反应的影响 | 第45-46页 |
| ·不同pH值对生物催化反应的影响 | 第46页 |
| ·不同温度对生物催化反应的影响 | 第46-47页 |
| ·不同葡萄糖浓度对生物催化反应的影响 | 第47-48页 |
| ·不同辅酶浓度对生物催化反应的影响 | 第48页 |
| ·反应时间对生物催化反应的影响 | 第48-49页 |
| ·现有文献中生物法制备(R)-CCE的比较 | 第49-50页 |
| 主要结论和展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50页 |
| 展望 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录A: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59-60页 |
| 附录B: 基因和蛋白序列 | 第60-62页 |
| 附录C: 底物和产物的GC分析图 | 第62-64页 |
| 附录D:不同表达条件下SyS1 和SyGDH酶活的单因素方差分析 | 第64-66页 |
