| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 英文缩略词及注解 | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| ·小单孢菌研究进展 | 第10-11页 |
| ·氨基糖苷类抗生素概述 | 第11-14页 |
| ·氨基糖苷类抗生素简介 | 第11-12页 |
| ·氨基糖苷类抗生素药理作用 | 第12-13页 |
| ·氨基糖苷类抗生素生物合成 | 第13-14页 |
| ·2-DOS生物合成途径 | 第13页 |
| ·卡那霉素生物合成 | 第13-14页 |
| ·庆大霉素概述 | 第14-23页 |
| ·庆大霉素简介 | 第14-17页 |
| ·庆大霉素工程菌改造研究 | 第17页 |
| ·庆大霉素生物合成研究 | 第17-23页 |
| ·庆大霉素拟三糖合成途径 | 第19页 |
| ·庆大霉素C_1合成途径 | 第19-20页 |
| ·庆大霉素C_(2b)合成途径 | 第20-23页 |
| ·庆大霉素发酵研究 | 第23页 |
| ·庆大霉素提取分离研究 | 第23-24页 |
| ·庆大霉素检测研究 | 第24页 |
| ·本课题的立题依据及研究内容 | 第24-26页 |
| ·立题依据 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-39页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28-30页 |
| ·主要溶液及缓冲液 | 第28页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第28-29页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第29-30页 |
| ·仪器和设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-39页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第31页 |
| ·绛红色小单孢菌基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR反应体系 | 第32页 |
| ·PCR反应程序 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·DNA片段回收 | 第33-34页 |
| ·DNA片段去磷酸化 | 第34页 |
| ·DNA酶连反应 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·大肠杆菌质粒的转化(CaCl_2转化法) | 第35页 |
| ·SDS碱变性法制备质粒 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌与小单孢菌的接合转移 | 第36-37页 |
| ·绛红色小单孢菌摇瓶发酵 | 第37页 |
| ·庆大霉素发酵液处理 | 第37页 |
| ·庆大霉素生物效价测定 | 第37-38页 |
| ·代谢产物检测分析 | 第38-39页 |
| 第三章 庆大霉素生物合成基因genN的研究 | 第39-47页 |
| ·GenN蛋白结构功能分析 | 第39-40页 |
| ·GenN蛋白序列基本性质分析 | 第39页 |
| ·GenN蛋白三维结构及功能分析 | 第39-40页 |
| ·genN基因敲除研究 | 第40-44页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的导入与单交换菌株验证 | 第42-43页 |
| ·工程菌GKN27的筛选与验证 | 第43-44页 |
| ·工程菌GKN27稳定性考察 | 第44-45页 |
| ·工程菌GKN27代谢产物HPLC-MS分析 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第四章 庆大霉素生物合成基因genO的研究 | 第47-54页 |
| ·基因genO功能的理论分析 | 第47-48页 |
| ·genO基因敲除研究 | 第48-52页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第48-50页 |
| ·单交换突变菌构建 | 第50页 |
| ·双交换突变菌(△genO)筛选 | 第50-52页 |
| ·工程菌G091稳定性考察 | 第52页 |
| ·工程菌G091代谢产物分析 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第五章 庆大霉素生物合成基因genP的研究 | 第54-62页 |
| ·基因genP功能的理论分析 | 第54-55页 |
| ·genP基因敲除研究 | 第55-59页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·单交换小单孢工程菌构建 | 第57-58页 |
| ·双交换工程菌GKP116(ΔgenP)的筛选 | 第58-59页 |
| ·工程菌GKP116稳定性考察 | 第59-60页 |
| ·工程菌GKP116代谢产物分析 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第六章 庆大霉素X_2小单孢工程菌的构建 | 第62-72页 |
| ·出发菌株M.purpurea GK1101的选取 | 第62-63页 |
| ·M.purpurea GK1101基因组DNA的提取 | 第62-63页 |
| ·穿梭质粒pFU803的构建 | 第63-65页 |
| ·同源交换臂的克隆 | 第63-64页 |
| ·pFU803质粒的构建流程 | 第64-65页 |
| ·单交换工程菌构建 | 第65-67页 |
| ·接合转移 | 第65-66页 |
| ·突变株筛选 | 第66-67页 |
| ·工程菌GKB3226发酵产物分析 | 第67-71页 |
| ·工程菌GKB3226产物TLC检测 | 第67-68页 |
| ·工程菌GKB3226代谢产物的质谱分析 | 第68-69页 |
| ·工程菌GKB3226发酵优化 | 第69-71页 |
| ·碳源对发酵单位的影响 | 第69-70页 |
| ·溶氧对发酵单位的影响 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84页 |