| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1. 文献综述 | 第9-16页 |
| ·防御素的种类,分子结构及其分布 | 第9-10页 |
| ·动物防御素的生物活性 | 第10-13页 |
| ·动物防御素的抗菌活性及影响因素 | 第10-11页 |
| ·防御素的抗菌机理 | 第11-12页 |
| ·抗病毒活性 | 第12页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第12页 |
| ·其他生物学活性 | 第12-13页 |
| ·猪β防御素的研究概况 | 第13页 |
| ·防御素的应用 | 第13-14页 |
| ·防御素的分子改造 | 第14-16页 |
| 2. 引言 | 第16-17页 |
| 3. 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·引物合成、质粒和菌种 | 第17页 |
| ·酶和试剂盒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要试剂及配制 | 第17-18页 |
| ·主要的仪器与设备 | 第18页 |
| ·主要应用软件 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-30页 |
| ·猪β防御素-2优化基因的合成 | 第18-19页 |
| ·多点突变基因的引物设计与合成 | 第19-20页 |
| ·PCR扩增获得目的基因 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的凝胶回收 | 第21页 |
| ·克隆载体的构建 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·转化及筛选 | 第22页 |
| ·重组质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pMD18-T-M1～M6的鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组质粒PCR检测 | 第23-24页 |
| ·重组质粒双酶切检测 | 第24页 |
| ·测序鉴定 | 第24页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·表达载体的筛选和鉴定 | 第25页 |
| ·PCR检测 | 第25页 |
| ·双酶切检测 | 第25页 |
| ·测序鉴定 | 第25页 |
| ·重组工程菌株BL21-pET30a-M1～M6的诱导表达 | 第25页 |
| ·重组目的蛋白的提取和纯化 | 第25-27页 |
| ·试剂配制 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第27-28页 |
| ·相关溶液的配制 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE胶的制作 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| ·蛋白功能活性的分析 | 第28-30页 |
| ·蛋白抑菌活性分析 | 第28-29页 |
| ·蛋白溶血活性检测 | 第29-30页 |
| 4. 结果与分析 | 第30-41页 |
| ·pBD2基因的优化及其克隆表达 | 第30页 |
| ·PCR扩增获得含多点突变的目的基因 | 第30-31页 |
| ·pMD18-T-M1～M6重组质粒PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·pMD18-T-M1～M6重组质粒双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·pMD18-T-M1～M6重组质粒的测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·pET30a-M1～M6重组质粒PCR鉴定 | 第33页 |
| ·pET30a-M1～M6重组质粒双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·pET30a-M1～M6重组质粒测序鉴定 | 第34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白与致病菌共培养24小时内生长趋势分析 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白对S.aureus 25923的抑菌活性分析 | 第36-38页 |
| ·目的蛋白对E.Coli 25922的抑菌活性分析 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的溶血活性分析 | 第39-41页 |
| 5. 讨论与结论 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·对猪β防御素-2进行密码子优化 | 第41页 |
| ·猪β防御素-2的多位点突变 | 第41-42页 |
| ·溶血活性检测 | 第42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| ABSTRACT | 第48-50页 |
| 附件 | 第50-52页 |
