| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 材料与方法 | 第14-26页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·质粒与菌种 | 第14页 |
| ·酶以及主要分子生物学试剂 | 第14-15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15页 |
| ·感受态的制备 | 第15-16页 |
| ·CaC1_2 法制备BL21(DE3)感受态细胞 | 第15-16页 |
| ·CaC1_2 法制备Rosetta(DE3)感受态细胞 | 第16页 |
| ·重组原核表达载体pET-28a-LDH 表达菌的选择 | 第16-20页 |
| ·重组原核表达载体pET-28a-LDH 转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第16-18页 |
| ·LDH 重组原核表达载体的转化Rosetta(DE3) | 第18-20页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第20-22页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳及凝胶扫描分析 | 第20-22页 |
| ·凝胶的染色和脱色 | 第22页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达 | 第22-23页 |
| ·工程菌的大量培养 | 第22页 |
| ·工程菌体裂解及包涵体溶解洗涤 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白的纯化及鉴定. | 第23-24页 |
| ·HisTRAP FF 柱的处理 | 第23-24页 |
| ·纯化 | 第24页 |
| ·鉴定纯化后的蛋白 | 第24页 |
| ·活性测定 | 第24-26页 |
| 结果 | 第26-33页 |
| ·pET-28a-LDH 重组质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)的 PCR 及酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·pET-28a-LDH 质粒转化 Rosetta(DE3)的 PCR 及酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·pET-28a-LDH 工程菌未经 IPTG 诱导时重组蛋白的表达 | 第28-29页 |
| ·pET-28a-LDH 工程菌经 IPTG 诱导后表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的性质鉴定 | 第30-33页 |
| 讨论 | 第33-39页 |
| ·优化表达条件，提高表达量 | 第33-35页 |
| ·宿主菌BL21（DE3）与Rosetta(DE3)的选择 | 第33-34页 |
| ·优化表达条件 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的纯化、活性测定及研究意义 | 第35-39页 |
| ·重组蛋白的纯化、活性测定 | 第35页 |
| ·研究意义 | 第35-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 英汉对照表 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
